狼疮肾炎患者尿蛋白刺激人HK-2细胞NF-κB及其相关因子的表达

论文摘要

目的:研究狼疮肾炎（lupus nephritis,LN）患者尿蛋白刺激人近端肾小管上皮细胞（HK-2）NF-κB及其相关炎性因子TNF-α、IL-6的表达及与刺激时间的相关性。方法:收集6例已确诊为LN患者,且临床尚未开始肾上腺皮质激素和（或）细胞毒药物治疗。采集LN患者24小时尿液,提纯尿蛋白。用1mg/ml尿蛋白刺激无血清培养基培养24h后HK-2细胞,刺激时间分别为1h,3h,6h,12h,24h,48h。以无血清培养基培养24h后的HK-2细胞作对照,通过逆转录多聚酶反应（RT-PCR）观察不同时间点尿蛋白对HK-2细胞NF-κBmRNA、TNFαmRNA、IL-6mRNA的表达。结果:1mg/ml尿蛋白均能上调HK-2细胞NF-κBmRNA、TNFαmRNA、IL-6mRNA的表达,随着刺激时间的延长表达逐渐增强,48h达高峰。与无血清培养基培养24h后的HK-2细胞比较NF-κBmRNA、TNFαmRNA、IL-6mRNA的表达,差异具有统计学意义（P<0.05）。经相关性分析,细胞NF-κBmRNA、IL-6mRNA、TNFαRNA表达改变在48h内呈时间依赖性,r值分别为0.863,0.892,0.803。P均﹤0.05。细胞NF-κBmRNA与IL-6mRNA表达改变、TNFαRNA表达改变均呈正相关（分别为r=0.955,P﹤0.05和r=0.983,P﹤0.05）。结论:狼疮肾炎患者1mg/ml尿蛋白可刺激HK-2细胞上调NF-κB、TNFα、IL-6mRNA的表达,48h内呈时间依赖性。NF-κB可能通过上调细胞因子IL-6、TNFα,从而介导肾间质小管炎症及纤维化。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 第1章 引 言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 实验分组
• 2.2 患者入选标准
• 2.3 材料
• 2.3.1 样品
• 2.3.2 主要试剂和仪器
• 2.4 方法
• 2.4.1 尿蛋白的提纯
• 2.4.2 细胞培养及传代
• 2.4.3 总RNA 提取
• 2.4.4 逆转录-聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）:
• 2.4.5 多聚酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）
• 2.4.6 电泳（Electrophoresis）鉴定
• 2.5 统计学分析
• 第3章 结果
• 3.1 人近端肾小管上皮细胞株（HK-2 细胞）
• 3.2 RNA 质量鉴定
• 3.3 狼疮肾炎患者尿蛋白对 HK-2 细胞 NF-κBmRNA 表达的影响
• 3.4 狼疮肾炎患者尿蛋白对 HK-2 细胞 IL-6mRNA 表达的影响
• 3.5 狼疮肾炎患者尿蛋白对 HK-2 细胞 TNFαmRNA 表达的影响
• 3.6 NF-κBmRNA 与 IL-6mRNA、TNFαmRNA 表达改变相关性分析
• 第4章 讨论
• 4.1 肾间质纤维化
• 4.2 肾间质纤维化与蛋白尿的关系
• 4.3 NF-κB概述
• 4.4 NF-κB与肾间质纤维化的关系
• 第5章 结论与展望
• 5.1 结论
• 5.2 进一步工作的方向
• 致谢
• 参考文献
• 附图
• 综述
• 攻读学位期间的研究成果