鹅VLDLR基因亚型的序列变异及其组织表达差异研究

论文摘要

极低密度脂蛋白受体（Very low-density lipoprotein receptor，VLDLR）是低密度脂蛋白受体（Low-density lipoprotein receptor，LDLR）家族的一员，主要功能是结合富含载脂蛋白E的脂蛋白参与甘油三酯的代谢。本试验以朗德鹅和天府肉鹅为研究对象，用生物信息学的方法对鹅VLDLR亚型的序列特点、结构和功能进行分析和预测。使用RT-PCR方法研究鹅VLDLR基因的表达特性，以及填饲对VLDLR基因表达的影响和可能机理。研究结果表明：1．鹅VLDLR基因存在两个亚型，Ⅰ型VLDLR核苷酸序列与兔、大鼠、小鼠、人同源性分别为82％、81％、81％、80％，氨基酸同源性分别为80％、77％、77％、78％；Ⅱ型VLDLR核苷酸序列与鸡、兔、大鼠、小鼠、人同源性分别为90％、82％、81％、81％、80％，氨基酸序列同源性分别为92％、70％、70％、80％、79％。2．鹅Ⅱ型VLDLR比Ⅰ型VLDLR缺少30个氨基酸残基，人、大鼠、小鼠、兔、牛缺少28个氨基酸残基。Ⅱ型VLDLR缺失区域为O-linked糖链域，该区域的缺失可能对VLDLR的结构和功能产生影响。3．鹅VLDLR跨膜域与鸡相比有2个氨基酸变异位点，与哺乳动物相比存在6个氨基酸变异位点，多为同极性的氨基酸变异。鹅VLDLRO-linked糖链域与鸡比有1个氨基酸变异位点，与哺乳动物相比存在9～13个氨基酸变异，其中包含丝氨酸、苏氨酸的变异，这种变异可能会影响O-linked糖链域的O糖基化。4．VLDLR两亚型在鹅腹脂、皮脂、腿肌中均有表达，且腿肌的表达量高于脂肪组织。在腿肌中，Ⅰ型VLDLR为主要表达受体；在脂肪组织中，两亚型的表达无显著差异。5．Ⅰ型VLDLR在肌肉、脂肪等脂肪代谢活跃的组织高表达，而且Ⅰ型VLDLR与VLDL、β—VLDL的结合和摄取能力高于Ⅱ型VLDLR，提示Ⅰ型VLDLR与组织的脂质代谢水平相关联。Ⅱ型VLDLR，根据相关资料推测可能在组织分化和生长发育过程中起重要作用。6．填饲后，鹅机体可根据体内脂质代谢的变化对VLDLR亚型的表达量进行调节。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 1 文献综述
• 1.1 VLDLR的结构
• 1.2 VLDLR的功能
• 1.2.1 VLDLR与脂蛋白代谢
• 1.2.2 VLDLR的信号功能
• 1.3 VLDLR的表达与调控研究
• 1.3.1 VLDLR的组织分布
• 1.3.2 VLDLR的表达调控
• 1.3.2.1 （SRE-1）类似序列对VLDLR表达的影响
• 1.3.2.2 位点D和反向CCAAT盒对VLDLR表达的影响
• 1.3.2.3 激素受体结合的半位点对VLDLR表达的影响
• 1.3.2.4 食物对VLDLR表达的影响
• 1.4 VLDLR亚型的研究进展
• 1.5 本研究的目的意义
• 2 材料与方法
• 2.1 试验动物来源
• 2.2 试验设计及样品采集
• 2.2.1 试验设计
• 2.2.2 试验动物的饲养管理
• 2.2.3 样品采集
• 2.3 仪器和试剂
• 2.3.1 主要仪器设备
• 2.3.2 试剂和试剂盒
• 2.3.3 试剂的配制
• 2.4 试验方法
• 2.4.1 总RNA的提取
• 2.4.2 总RNA质量和浓度的检测
• 2.4.3 cDNA第一条链的合成（RT）
• 2.4.4 PCR扩增
• 2.4.5 测序
• 2.4.6 血浆生化指标的测定
• 2.5 数据处理与统计分析
• 2.5.1 生物信息学分析
• 2.5.2 表达分析
• 3 结果与分析
• 3.1 腿肌和脂肪组织总RNA的抽提
• 3.2 VLDLR基因的测序及序列生物信息学分析
• 3.2.1 同源性分析及VLDLR基因亚型的确定
• 3.2.2 序列的结构特点
• 3.2.2.1 两亚型的序列差异
• 3.2.2.2 O-linked糖链域的特点
• 3.2.2.3 跨膜域的特点
• 3.2.3 蛋白质性质分析及结构功能预测
• 3.2.3.1 跨膜区的分析
• 3.2.3.2 疏水性分析
• 3.2.3.3 糖基化位点的分析
• 3.2.4 分子系统发育分析
• 3.3 VLDLR两亚型的表达差异
• 3.3.1 天府肉鹅和朗德鹅各组织两亚型表达丰度
• 3.3.2 填饲对VLDLR两亚型的表达的影响
• 3.4 VLDLR的表达与肝外脂肪沉积
• 3.5 VLDLR的表达与血浆VLDL、TG浓度
• 4 讨论
• 4.1 VLDLR基因亚型的序列变异特点与功能
• 4.2 VLDLR亚型的组织表达差异
• 4.3 填饲对VLDLR亚型表达的影响
• 4.4 PCR的优化
• 5 结论
• 6 参考文献
• 致谢
• 附录:攻读学位期间参与的科研项目和发表的学术论文目录