雌孕激素替代治疗雷公藤多甙致雌性大鼠生殖系统损害的实验研究

论文摘要

雷公藤作为基础免疫抑制剂已广泛应用于各种原发及继发性免疫性肾小球疾病,自身免疫性疾病,移植的抗排异等治疗中,在临床应用具有良好的前景。但抗生殖作用却使其对生殖系统损害成为影响治疗的最大副作用之一。据统计服用半年后约半数以上的女性患者会出现月经紊乱或闭经。针对雷公藤制剂导致的女性生殖系统损害,我们把雌孕激素序贯疗法（HPT）应用到临床治疗中,效果明显。为通过动物实验进一步验证该治疗方案,我们设计了一套实验方法,也希望为该治疗方案提供一定的病理及分子理论基础,以期能将此方案推广至临床应用及至未来的药品研发中。同时有研究表明检测卵巢颗粒细胞中FOXL2 mRNA的表达情况可较直接地反映卵巢的储备功能,也可以作为精确反映卵巢功能状态的早期监测指标。目的通过雌、孕激素序贯性（HPT）干预治疗,探讨雌孕激素对雷公藤多甙（TWP）所致大鼠生殖系统损害的保护作用及卵巢早衰（POF）的防治方法,并试图通过颗粒细胞上FOXL2基因mRNA的表达情况探究其发生的机制。方法SD大鼠60只随机分为正常对照组（A组）、自然恢复组（B组）及雌孕激素干预组（C组）,前12周B组、C组每天均给予TWP灌胃造模,A组给予等量溶媒:后4周C组给予HPT干预治疗,A、B组给予等量溶媒。为期16周。分别观察3组大鼠动情周期,生殖器官重量及组织形态学变化,性激素水平改变;采用半定量RT-PCR法检测卵巢颗粒细胞上FOXL2 mRNA的表达。结果（1）与A组相比,B组大多动情周期缺失、不完整或延长（P＜0.05,提示差距有统计学意义）;子宫及卵巢相对重量明显下降（P＜0.05）,结构受损:光镜形态学观察可见卵巢萎缩,各级卵泡减少,黄体退化萎缩,子宫内膜变薄,腺体减少,胶原纤维的增多。血清雌激素（E2）水平明显降低,、卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）水平则明显升高（P＜0.05）。（2）与A组相比,C组动情周期规律;子宫、卵巢的重量无明显下降（P＞0.05）;子宫各结构未见异常,E2、FSH及LH水平无明显改变（P＞0.05）。结论TWP可致雌性大鼠生殖系统的损害,HPT对卵巢功能有较好的保护作用,可促进所致损害的恢复,是防治TWP所致POF的有效方法之一。

论文目录

• 英文缩略词表
• 中文摘要
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• 1 前言
• 2 材料
• 2.1 动物
• 2.2 药品
• 2.3 试剂
• 2.4 仪器及设备
• 2.5 溶液配制
• 3 实验方法
• 3.1 正常动情周期大鼠的选取
• 3.2 动物分组及处理
• 3.2.1 一期实验
• 3.2.1.1 用药方案
• 3.2.1.2 观察指标
• 3.2.2 二期实验
• 3.3 子宫、卵巢组织的病理形态学分析
• 3.3.1 HE（苏木素-伊红）染色
• 3.3.2 子宫、卵巢的病理形态学观察
• 3.4 血清E2、FSH、LH的测定
• 3.4.1 原理
• 3.4.2 操作方法
• 3.4.3 结果计算
• 3.5 颗粒细胞上FOXL2基因的表达测定
• 3.5.1 颗粒细胞总RNA的提取
• 3.5.2 RNA定性与定量分析
• 3.5.3 两步RT-PCR方法检测上述目的基因mRNA表达量的变化
• 3.5.4 用琼脂糖凝胶电泳检测PCR结果
• 3.6 统计学处理
• 4 结果
• 4.1 各组大鼠的动情周期的变化
• 4.2 各组大鼠生殖器官指数的改变
• 2、FSH、LH的影响'>4.3 对各组大鼠血清E₂、FSH、LH的影响
• 4.4 光镜下子宫卵巢组织形态学观察
• 4.4.1 卵巢的组织形态学观察
• 4.4.2 子宫内膜的组织形态学观察
• 4.5.卵巢颗粒细胞上凋亡基因FOXL2的表达情况
• 4.5.1 卵巢颗粒细胞的形态学观察
• 4.5.2 卵巢颗粒细胞计数
• 4.5.2.1 计数步骤
• 4.5.2.2 计数结果
• 4.5.3 颗粒细胞FOXL2 mRNA转录水平的检测
• 4.5.3.1 小鼠卵巢颗粒细胞FOXL2 RT-PCR产物电泳图
• 4.5.3.2 SD大鼠卵巢颗粒细胞FOXL2 RT-PCR产物电泳图
• 附图
• 5.讨论
• 5.1 雷公藤制剂的临床应用及作用机制
• 5.2 TW的药理作用
• 5.3 雷公藤制剂对雌性生殖系统的影响及作用机制
• 5.4 HPT的保护机制
• 5.5 颗粒细胞上的Foxl2基因
• 6 结论
• 参考文献
• 个人简历
• 致谢
• 综述
• 参考文献