亚牛磺酸、透明质酸酶对马鹿精子体外获能影响的研究

论文摘要

精子在受精前必须获能，这是哺乳动物独具的特性。所以精子体外诱导获能是体外受精研究中必须首先解决的问题之一。本研究以马鹿为试验对象，开展了亚牛磺酸、透明质酸酶对鹿精子体外获能影响的研究。以期筛选出亚牛磺酸、透明质酸酶在实践中具有良好效果的使用方法及用量。对马鹿精子，使用上浮法诱导其获能，通过顶体染色测定精子的顶体反应率作为主要指标，同时以精子活率为辅助指标，对亚牛磺酸、透明质酸酶对马鹿精子的获能效果进行评价。研究结果如下：1、在BO培养基中加入30～200μmol／L亚牛磺酸可以提高马鹿精子体外获能的水平，其中适宜的亚牛磺酸浓度为100μmol／L。在TALP培养基中加入30～200μmol／L亚牛磺酸可以提高马鹿精子体外获能的水平，其中适宜的亚牛磺酸浓度为100μmol／L。亚牛磺酸在TALP培养基中的使用效果优于在BO培养基中的使用效果(p＜0.05)。2、在BO培养基中加入0.5～1.5g／L透明质酸酶可以提高马鹿精子体外获能的水平，其中适宜的透明质酸酶浓度为1g／L。在TALP培养基中加入0.5～1.5g／L透明质酸酶可以提高马鹿精子体外获能的水平，其中适宜的透明质酸酶浓度为1g／L。透明质酸酶在BO培养基中的使用效果优于在TALP培养基中的使用效果(p＜0.05)。3、在BO培养基中加入30～200μmol／L亚牛磺酸可以延长获能后马鹿精子的活率。在TALP培养基中加入30～200μmol／L亚牛磺酸可以延长获能后马鹿精子的活率。4、透明质酸酶对获能后马鹿精子活率无影响。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 哺乳动物精子体外获能研究概况
• 1.3 精子获能机理
• 1.4 影响精子体外获能的因素
• 1.4.1 动物种类与精子来源部位
• 1.4.2 温度、pH值、渗透压
• 1.4.3 培养液成分
• 1.4.4 精子的预处理
• 1.5 精子体外获能的处理方法
• 1.5.1 HIS
• 2+法'>1.5.2 Ca²⁺法
• 1.5.3 氨基多糖
• 1.5.4 血清白蛋白
• 1.5.5 其它
• 1.6 获能精子的检测
• 1.6.1 去能因子（DF）鉴定法
• 1.6.2 测验精子的呼吸能
• 1.6.3 超激活运动（HAM）观察法
• 1.6.4 顶体反应检测法
• 1.6.5 精子穿卵试验（SPA）
• 1.6.6 金霉素荧光染色法（CTC）
• 1.6.7 相差显微镜检查法
• 1.6.8 三色染色法
• 1.6.9 电子显微镜检查法
• 1.7 亚牛磺酸、牛磺酸
• 1.7.1 对细胞的保护作用
• 1.7.2 影响繁殖性能
• 1.8 透明质酸酶
• 1.8.1 透明质酸酶活性的调节
• 1.8.2 精子中的透明质酸酶
• 1.9 研究的目的
• 2 材料与方法
• 2.1 试验材料
• 2.1.1 精液来源
• 2.1.2 主要仪器设备
• 2.1.3 主要试剂、药品
• 2.1.4 主要操作用液
• 2.2 精子解冻
• 2.3 诱发马鹿精子体外获能
• 2.4 诱发获能马鹿精子顶体反应
• 2.5 精子的检测方法
• 2.5.1 密度检测
• 2.5.2 精子低渗抗性检测
• 2.5.3 三色染色法检查精子的顶体状态
• 2.6 试验方案
• 2.6.1 亚牛磺酸对马鹿精子获能的影响的研究方案
• 2.6.2 透明质酸酶对马鹿精子获能的影响的研究方案
• 2.6.3 精子获能后活率的检测
• 3 试验结果
• 3.1 亚牛磺酸对马鹿精子获能的影响
• 3.1.1 亚牛磺酸在BO培养基使用浓度的筛选
• 3.1.2 亚牛磺酸在TALP培养基使用浓度的筛选
• 3.1.3 亚牛磺酸在获能液（BO培养基）中使用浓度的筛选
• 3.1.4 亚牛磺酸在获能液（TALP培养基）中使用浓度的筛选
• 3.2 透明质酸酶对马鹿精子获能的影响
• 3.2.1 透明质酸酶在BO培养基中使用浓度的筛选
• 3.2.2 透明质酸酶在TALP培养基中使用浓度的筛选
• 3.2.3 透明质酸酶获能液（BO培养基）中使用浓度的筛选
• 3.2.4 透明质酸酶获能液（TALP培养基）中使用浓度的筛选
• 3.3 亚牛磺酸对精子活率的影响
• 3.3.1 不同浓度亚牛磺酸（BO培养基）对精子活率的影响
• 3.3.2 不同浓度亚牛磺酸（TALP培养基）对精子活率的影响
• 3.4 透明质酸酶对精子活率的影响
• 3.4.1 不同浓度透明质酸酶（BO培养基）对精子活率的影响
• 3.4.2 不同浓度透明质酸酶（TALP培养基）对精子活率的影响
• 4 分析与讨论
• 4.1 亚牛磺酸对马鹿精子获能的作用
• 4.2 亚牛磺酸对马鹿精子活率的作用
• 4.3 透明质酸酶对马鹿精子体外获能的作用
• 结论
• 参考文献
• 攻读学位期间发表的学术论文
• 致谢