论文摘要
目的:在肿瘤的生长过程中会遭遇一系列对肿瘤生长不利的因素,如缺氧、营养缺乏、PH改变等,这些情况激活包括未折叠蛋白反应在内的一系列的细胞应激反应通路,从而影响肿瘤细胞的生长。而未折叠蛋白反应（unfolded protein response,UPR）是内质网应激的一种类型,是指由于细胞遭受影响蛋白质折叠的不利条件时,错误折叠与未折叠蛋白质不能按正常途径出内质网从而在其腔内聚集,激活信号传导级联反应,继而引起靶基因转录上调和蛋白质翻译水平下调。它是内质网应激的主要信号通路之一,通过UPR细胞增加蛋白质折叠能力,重塑分泌通路以适应生长需要和环境改变。参与内质网未折叠蛋白反应的信号分子主要有Ire1、Bip（GRP78）、XBP1、ATF6和PERK等。XBP1是参与细胞分化的一个调控因子,促进细胞分化,也是未折叠蛋白反应元件的一个重要组分;VEGF - C是VEGF家族主要成员之一,其有促进血管和淋巴管生成作用,参与生理性、病理性淋巴管和血管新生;Bip在未折叠蛋白反应信号传导通路中处于核心地位,被认为是未折叠蛋白反应的标志性分子,具有帮助错误折叠的蛋白恢复成正确折叠方式的作用,是目前研究最多的UPR途径转录的靶分子。但目前还没有研究全面的分析UPR的激活通路以评价UPR的哪些分支被激活及其激活程度或判断哪一部分的肿瘤细胞经历了内质网应激。肝癌是肝脏发生的恶性肿瘤,其生物学行为及其内在机制一直是研究重点。但对于肝癌的恶性生物学行为及其内在机制的研究多数局限在单个基因功能与肝癌的关系上,而对于多个基因之间及与肝癌的生长调控之间的关系、作用机制和与临床之间的关系却知之甚少。肝癌中UPR的激活程度,及UPR激活对肝癌恶性生物学行为有何影响,我们亦知之甚少。本实验通过RT-PCR及Western blot途径检测XBP1、Bip、VEGF-C在肝癌组织中的表达,验证了在肝癌生长过程中存在未折叠蛋白反应的激活,且其表达高于正常组织,并探讨其在肝癌生长中的作用机制。为肝癌治疗寻找新的靶点。方法1实验标本采取肝癌、癌旁肝组织、正常肝组织1.1采用RT-PCR和Western blot方法检测术中所取新鲜的42例肝癌标本、15例相同个体癌旁1.0cm肝组织和15例正常肝组织中XBP1、Bip、VEGF-C的mRNA和蛋白的表达,42例术中所取的标本均通过病理学诊断证实。经Gel-proAnalyzer3.1软件分析RT-PCR产物的光密度（optical density,OD）,计算XBP1、Bip、VEGF-C的OD值与内参照基因（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH）OD值的比值,作为目的基因产物mRNA的相对含量。1.2应用Western Blot方法验证57例肝组织和正常肝组织标本中XBP1、Bip在蛋白水平的表达。所取标本均通过病理学诊断证实。2应用The SAS System for Windows v6.12软件进行统计学处理。实验数据以均数±标准差（x±s）表示,不同组别实验数据比较采用方差分析（ANOVA）,进一步两两比较采用t检验（LSD法）;以α=0.05为检验水准,当P<0.05时具有统计学意义。结果1用RT-PCR方法72例不同肝组织XBP1、Bip、VEGF-C的mRNA表达情况肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中XBP1 mRNA相对表达量分别为0.4396±0.0241、0.4152±0.0252、0.4095±0.0149,XBP1 mRNA在三组之间的表达呈下降趋势（P<0.05）;肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中VEGF-C mRNA相对表达量分别为0.4447±0.0335、0.4195±0.0334、0.4019±0.0259,VEGF-C mRNA在三组之间的表达呈下降趋势（P<0.05）;肝癌组织、癌旁肝组织、正常肝组织中Bip mRNA相对表达量分别为0.4772±0.0401、0.4332±0.0488、0.4301±0.0398,Bip mRNA在三组之间的表达呈下降趋势（P<0.05）。2用Western blot方法检测肝癌组织和正常肝组织中的XBP1和Bip的蛋白表达。实验对肝癌组织和正常肝组织中的XBP1和Bip的蛋白表达进行了定性验证:在肝癌组织和正常肝组织中均有两种蛋白的表达,但肝癌组织中的表达明显高于正常肝组织。结论1在肝癌的生长过程中存在未折叠蛋白反应的激活。2在肝癌组织中XBP1、Bip、VEGF-C mRNA和蛋白的表达相一致,均呈高表达。这些基因和蛋白表达的改变可能与肝癌的发生、生长及转移有密切关系,可能在肝癌发生发展的分子机制中起重要作用。同时,也在一定程度上说明:在肝癌的发生过程中,未折叠蛋白反应可能具有非常重要的作用。