党参多糖的硒化修饰及其抗氧化和增强免疫活性的研究

论文摘要

党参多糖是党参的主要活性成分之一,具有增强免疫、抗氧化、抗病毒、抗疲劳、抑制肿瘤等作用。微量元素硒也具有抗氧化、增强免疫、参与辅酶Q合成、降低汞铅等金属毒性等功效。近年来研究发现,通过分子修饰可大大提高中药多糖的生物活性或产生许多新的药用价值。为了探讨硒化修饰提高多糖生物活性的可能性,本研究选择党参多糖为研究对象,进行提取、分离和纯化,优化其硒化修饰条件并进行硒化修饰,比较了其修饰前后的抗氧化和增强免疫活性的变化,研究分为以下五个部分：试验1.党参多糖的提取、纯化和分离用水煎醇沉法提取党参粗多糖CPPSc,用三氯乙酸法去蛋白、过DEAE-纤维素柱分别用蒸馏水、NaCl溶液洗脱,得到两种纯化党参多糖CPPSpl和CPPSp2,并将CPPSp1过Sephadex G-200凝胶柱鉴定,分别用苯酚-硫酸法和考马斯亮兰G-250法测定多糖和蛋白含量。结果显示,CPPSc的提取率为9.677%,糖含量为76.01%,蛋白含量为3.67%；CPPSpl和CPPSp2的得率分别为3.792%和2.741%,多糖含量分别为99.95%和25.77%,蛋白含量为0.02%和0.05％；CPPSp1过Sephadex G-200凝胶柱仍得到单一峰,说明CPPSpl为均一多糖。试验2.党参多糖硒化修饰条件的优化用响应面法研究了党参多糖硒化修饰条件中反应时间（A）、反应温度（B）、试剂比（C）对产物得率和硒含量的影响,建立了回归模型,检验了模型的可靠性,分析了因素间的交互作用,对模型进行了验证,并对硒化党参多糖进行红外光谱分析。结果表明,在反应时间5～10h、温度50～90℃、试剂比0.4～1.2范围内,三个因素与产物得率（Y1）和硒含量（Y2）的二次多项式回归方程为Y1=94.74163-4.97620A-1.31068B一35.32375C+（5.10000E-003）A B+1.09500A C+0.28688B C+0.25288A2+（5.85125E-003）B+21.81563C.,Y2=-45.42204+2.27043A+0.80002B+41.9153C-0.025588A B-0.77625A C+0.15172B C+0.036755A2-（4.50696E-003）B2-30.57598C2；方差分析证明,2个方程拟合情况好,可用来控制修饰条件；三个因素对产物得率和硒含量的影响程度均为C>B>A；验证试验的产物得率和硒含量与预测值差异不显著；红外光谱显示硒化党参多糖中含有亚硒酸酯、硒酸酯键,说明党参多糖被硒化。试验3.硒化党参硒多糖对小鼠血清CAT活性和MDA含量的影响清洁级ICR小鼠168只,随机分为14组,每组12只。模型组和4个多糖（sCPPSp1、 sCPPSc CPPSp1、CPPSc）的高、中、低剂量组分别腹腔注射5%过氧化氢溶液0.1mL（诱导氧化损伤）；同时,各多糖组分别腹腔注射相应多糖溶液0.2mL,模型组和对照组注射等体积生理盐水,每天1次,连续8天。末次注射后次日每组随机抽取6只小鼠,摘眼球采血,分离血清,用试剂盒测定CAT的活性和MIDA的含量。结果显示,各多糖组的CAT活性均显著高于、MDA含量多显著低于模型组,各硒化多糖组的CAT活性均显著高于、MDA含量多显著低于同剂量的未修饰多糖组；同一多糖相比,随剂量的增加CAT活性升高、MDA含量降低,sCPPSp1高剂量组的CAT活性最高、MDA含量最低。表明,各多糖均有明显的抗氧化活性,硒化修饰能进一步提高党参多糖的抗氧化活性,且有一定的量效关系,sCPPSp1高剂量的活性最强。试验4.硒化党参多糖对小鼠脾脏发育和结构的影响实验动物和分组处理同试验3,于末次注射后次日每组随机抽取6只小鼠,称重,取脾脏称重,计算脾指数,取脾脏制作石蜡切片,测量脾被膜厚度和脾动脉周围淋巴鞘的淋巴细胞密度。结果显示,各多糖均能增大小鼠的脾指数、增加脾被膜厚度、提高淋巴细胞密度；硒化多糖各剂量组的脾指数、脾被膜厚度和淋巴细胞密度多大于或显著大于同剂量的未修饰多糖组；同一多糖相比,3项指标随剂量加大而升高,sCPPSp1高剂量组的脾指数和淋巴细胞密度最大。表明各多糖均能促进小鼠脾脏的发育、结构改善和淋巴细胞增殖,从而增强免疫,硒化修饰能进一步提高党参多糖的增强免疫活性,且有一定的剂量依赖关系,sCPPSp1高剂量的活性最强。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 符号及缩略语
• 第一章 文献综述
• 1 党参研究进展
• 1.1 党参的化学成分
• 1.2 党参的药理作用
• 2 党参多糖的研究进展
• 2.1 党参多糖的提取和纯化
• 2.2 党参多糖的组成
• 2.3 党参多糖的药理作用
• 3 硒化多糖的研究进展
• 3.1 硒多糖的来源
• 3.2 硒多糖的药理活性
• 3.3 硒多糖的研究前景
• 4 本研究的目的和意义
• 参考文献
• 第二章 党参多糖的提取和分离纯化
• 1 材料与方法
• 1.1 试验药物
• 1.2 主要试剂
• 1.3 主要仪器
• 1.4 党参多糖的提取
• 1.5 党参多糖的分离纯化
• 1.6 多糖含量的测定
• 1.7 蛋白含量的测定
• 2 结果
• 2.1 党参多糖的提取
• 2.2 党参多糖的分离纯化
• 2.3 党参多糖的鉴定
• 3 讨论
• 3.1 党参多糖的提取
• 3.2 党参多糖的分离纯化
• 3.3 多糖和蛋白含量的测定方法
• 参考文献
• 第三章 党参多糖硒化修饰条件的优化
• 1 材料与方法
• 1.1 试验药物
• 1.2 主要试剂及配制
• 1.3 主要仪器
• 1.4 硒化修饰的响应面试验设计
• 1.5 修饰操作
• 1.6 硒含量的测定
• 1.7 响应面分析
• 1.8 红外光谱鉴定
• 2 结果
• 2.1 响应面试验
• 2.2 模型及显著性检验
• 2.3 各因素间的交互作用分析
• 2.4 试验方案优化及结果验证
• 2.5 红外光谱分析
• 3 讨论
• 3.1 多糖的硒化修饰
• 3.2 响应面法的优势
• 3.3 硒含量的测定方法
• 3.4 红外光谱分析
• 参考文献
• 第四章 硒化党参多糖对小鼠CAT活性和MDA含量的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验药物
• 1.2 主要试剂与仪器
• 1.3 试验动物及分组处理
• 1.4 数据处理
• 2 结果
• 2.1 各组小鼠血清CAT活性的变化
• 2.2 各组小鼠血清MDA含量的变化
• 3 讨论
• 3.1 硒化党参多糖对CAT活性的影响
• 3.2 硒化党参多糖对血清MDA含量的影响
• 3.3 党参多糖抗氧化作用的量效关系
• 参考文献
• 第五章 硒化党参多糖对小鼠脾脏发育和结构的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 主要试剂
• 1.2 主要仪器
• 1.3 试验动物及分组处理
• 1.4 脾被膜厚度测量
• 1.5 脾淋巴小结的观察
• 1.6 脾动脉周围淋巴鞘淋巴细胞密度测量
• 1.7 数据统计与分析
• 2 结果
• 2.1 脾指数的变化
• 2.2 脾被膜厚度的变化
• 2.3 脾动脉周围淋巴鞘细胞密度的变化
• 3 讨论
• 3.1 硒化党参多糖对脾指数的影响
• 3.2 硒化党参多糖对脾被膜厚度的影响
• 3.3 硒化党参多糖对脾淋巴鞘细胞密度的影响
• 参考文献
• 全文结论
• 论文创新点
• 致谢