论文摘要
目的:研究皂荚提取物对人肝癌细胞的增殖、相关癌基因表达的调控作用及端粒酶的影响。本实验通过提取分离皂荚的活性物质,研究其对肝癌细胞的作用机制,为进一步分析其抗癌物质基础提供依据。方法:实验一:筛选皂荚对人肝癌细胞增殖影响的初级有效作用部位.根据皂荚按石油酸、乙醚、乙酸乙酯、正丁醇及水提取物的分析纯溶液将18只雄性wistar大鼠随机分为6组:（1）空白对照组（灌喂生理盐水）;（2）石油酸提取物溶液组;（3）乙醚提取物溶液组;（4）乙酸乙酯提取物溶液组;（5）正丁醇提取物溶液组;（6）水提取物溶液组,每组6只。通过MTT法检测以上各组对人肝癌细胞增殖的影响。实验二:进一步提纯皂荚抗癌作用初级有效部位（皂荚乙酸乙酯溶液提取部位）:根据进一步提取药物分为3组:对照组（不加药物组）、皂荚提纯物A组及皂荚提纯物B组。通过MTT法检测以上各组对人肝癌细胞增殖的影响。实验三:观察皂荚提取物对人肝癌细胞增殖的影响.随机分为4组:对照组（不加药物组）、皂荚提取物3个浓度组（0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL）,通过MTT法检测以上各组对人肝癌细胞增殖的影响。实验四:观察皂荚提取物对人肝癌细胞周期的影响.随机分为4组:对照组（不加药物组）、皂荚提取物3个浓度组（0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL）,在流式细胞仪上选择488nm激发光检测各组细胞DNA含量,得出凋亡率。实验五:观察皂荚提取物对人肝癌细胞凋亡相关基因的影响.随机分为4组:对照组（不加药物组）、皂荚提取物3个浓度组（0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL）,利用免疫组化法检测各组对肝癌相关基因（bax、bcl-2、p53）的影响。实验六:观察皂荚提取物对人肝癌细胞端粒酶的影响:随机分为4组:对照组（不加药物组）、皂荚提取物3个浓度组（0.05mg/mL、0.1mg/mL、0.2mg/mL）,以上各组端粒酶活性测定按端粒酶检测试剂盒说明书进行。实验所得数据采用t检验,spss10.0统计学软件进行统计学处理。结果:实验一:通过MTT法实验结果显示.皂荚乙酸乙酯提取物对人肝癌细胞bel-7402增殖均具有显著的抑制作用（P＜0.01）,皂荚石油酸提取物溶液、乙醚提取物溶液、正丁醇提取物溶液、水提取物溶液对bel-7402细胞增殖的抑制作用则无统计学意义（P＞0.05）;实验二:通过MTT法实验结果显示,皂荚乙酸乙酯提取物进一步提纯物B对人肝癌细胞bel-7402增殖均具有显著的抑制作用（P＜0.01）,提纯物A则对bel-7402细胞增殖的抑制作用则无统计学意义（P＞0.05）;实验三:皂荚提取物对bel-7402细胞增殖的影响:通过MTT法实验结果显示,皂荚提取物中浓度及高浓度组对人肝癌细胞bel-7402增殖均具有显著的抑制作用（P＜0.05）,其中高浓度组对bel-7402细胞增殖的抑制作用具有非常显著的统计学意义（P＜0.01）;实验四:皂荚提取物对bel-7402细胞周期的影响皂荚提取物低、中、高浓度组与对照组作用人肝癌bel-7402细胞72小时后,bel-7402细胞在G0～G1期的比例增高,S期的比例降低,与对照组比较差异非常显著（P＜0.01）,在G0～G1期前可见凋亡峰;实验五:皂荚提取物对bel-7402细胞凋亡基因的影响:实验结果显示,各药物血清组bcl-2表达显色与对照组比较无显著差异,p＞0.05;皂荚提取物低、中、高浓度血清组及对照组bax、p53表达显色较对照组明显加深,具有统计学意义（p＜0.05或P＜0.01）,且皂荚提取物低、中、高浓度血清组各组之间对bax、p53蛋白表达的影响对药物的浓度没有显示出太明显的依赖关系;实验六:皂荚提取物对bel-7402细胞端粒酶活性的影响:与对照组比较,皂荚提取物低、中、高浓度血清组及对照组A值均显著下降（p＜0.05或p＜0.01）,表明皂荚提取物低、中、高浓度血清组及对照组均可抑制bel-7402细胞端粒酶活性,其中皂荚提取物高浓度血清组对bel-7402细胞端粒酶活性的抑制具有非常显著的作用（p＜0.01）。结论:本课题研究结果显示,皂荚提取物对人肝癌细胞bel-7402的增殖有显著抑制作用,能够诱导bel-7402细胞凋亡,抑制bel-7402细胞端粒酶活性,调控癌基因活化与抑癌基因失活,阻止肿瘤细胞的无限繁殖。与对照组比较,皂荚提取物高浓度组对肿瘤细胞增殖的抑制作用更显著。初步表明,皂荚提取物对肿瘤细胞的作用可能机制是:①抑制活化的端粒酶,阻止细胞DNA的无限繁殖;②提升抑癌基因的活性,促进癌细胞的凋亡:③可能作为一种信息物质,直接参与细胞凋亡活动,抑制肿瘤细胞DNA无限复制,尚待进一步分析。