三氧化二砷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231作用的初步研究

论文摘要

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,发病率逐年增高,且日趋年轻化,严重危害着女性身心健康。其中约有1/3乳腺癌患者雌激素受体表达阴性,与表达阳性者相比,此类乳腺癌恶性程度高,预后差,尽管以手术、放疗、化疗为主的综合治疗已极大地提高了该类患者的生存率,但仍有较高的复发、转移率。三氧化二砷（arsenic trioxide,ATO,As2O3）俗称砒霜,20世纪70年代被用于治疗急性早幼粒白血病（acute promyelocytic leukemia, APL）,疗效显著且无严重毒副作用,之后备受关注,成为医学界研究焦点。越来越多的研究显示,除血液肿瘤细胞外,As2O3对多种实体瘤细胞有诱导凋亡和／或抑制生长的作用。但是As2O3应用于乳腺癌中的研究相对较少。本实验以雌激素受体阴性人乳腺癌细胞株MDA-MB-231为研究对象,观察三氧化二砷对该细胞增殖、细胞形态、细胞凋亡及凋亡相关蛋白的影响情况,探讨其可能的作用机制,为其将来可能应用乳腺癌临床治疗提供理论依据,以便能为该患者群开辟新的治疗途径。目的观察不同浓度As2O3对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231细胞增殖、细胞凋亡的影响,探讨其诱导凋亡的作用机制。方法将不同浓度的As2O3与MDA-MB-231细胞共同培养不同时间后,用MTT法检测As2O3对MDA-MB-231细胞的生长抑制作用；相差显微镜下观察细胞形态；应用原位缺口末端标记（TdT-mediated dUTP nick and labeling,TUNEL）检测细胞凋亡；免疫细胞化学技术检测细胞内survivin和caspase-3蛋白的表达情况。结果1.不同浓度的As2O3均能体外抑制MDA-MB-231细胞生长,且存在剂量、时间-效应关系,其24h IC50为43.13μM,48h IC50为5.64μM,72h IC50为1.96μM。2.相差显微镜下可见被As2O3作用24h后的MDA-MB-231细胞随作用浓度增加形态逐渐改变。对照组细胞贴壁良好,梭形或椭圆形,胞质均匀,细胞间紧密连接成片；实验组随As2O3作用浓度的增加,贴壁细胞逐渐减少,胞质内颗粒物质增多,细胞变圆,间隙增大。3.TUNEL法检测细胞凋亡,光镜下观察显示,对照组和经各浓度As2O3作用24h后的实验组细胞胞核均出现阳性染色,对照组仅个别细胞出现阳性染色；各组的阳性染色区平均灰度值存在差别（P<0.05）,阳性染色区平均灰度值随着作用浓度的增加而增高。4.三氧化二砷作用于MDA-MB-231细胞24h后,免疫细胞化学染色显示,随着药物浓度增加,Survivin蛋白表达减少而Caspase-3蛋白表达增加（P<0.05）,且两者呈负相关（P<0.001）。结论1.As2O3对体外培养的MDA-MB-231细胞增殖有抑制作用,并存在剂量、时间-效应关系。2.As2O3在体外可以诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡效应与剂量呈正相关。3.As2O3抑制survivin表达而激活caspase-3可能是其体外诱导凋亡机制之一。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 中英文缩略词对照表
• 三氧化二砷对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231作用的初步研究
• 第1章 引言
• 第2章 材料和方法
• 2.1 材料
• 2.2 实验方法
• 2.3 统计分析
• 第3章 实验结果
• 2O₃对MDA--MB-231细胞体外生长增殖的影响'>3.1 As₂O₃对MDA--MB-231细胞体外生长增殖的影响
• 2O₃处理MDA-MB-231细胞后的形态学改变'>3.2 As₂O₃处理MDA-MB-231细胞后的形态学改变
• 2O₃诱导MDA-MB-231细胞凋亡'>3.3 As₂O₃诱导MDA-MB-231细胞凋亡
• 2O₃对MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白表达的影响'>3.4 As₂O₃对MDA-MB-231细胞凋亡相关蛋白表达的影响
• 第4章 讨论
• 第5章 结论
• 参考文献
• 附图
• 综述部分 三氧化二砷的抗肿瘤机制及临床应用
• 参考文献
• 附录部分
• 致谢
• 个人简历及在学期间发表论文情况