南酸枣抗肿瘤活性成分的研究

论文题目: 南酸枣抗肿瘤活性成分的研究

论文类型: 硕士论文

论文专业: 药物化学

作者: 李长伟

导师: 崔承彬,陈英杰,窦德强

关键词: 药物化学,分离鉴定,色谱法,南酸枣,抗癌,流式细胞术

文献来源: 沈阳药科大学

发表年度: 2005

论文摘要: 本文采用温度敏感型小鼠乳腺癌tsFT210细胞的流式细胞术筛选模型，以细胞周期抑制、细胞凋亡诱导和坏死性细胞毒活性为抗肿瘤指标，首先对本实验室经初筛有效而大量采集的20种中草药进行了抗癌活性的复筛。在本文复筛的20种中草药中，12种在100μg／ml浓度下未能检测到相关活性，而其余8种则在同浓度下检测到不同程度的细胞周期抑制、细胞凋亡诱导或坏死性细胞毒等抗癌活性，复筛阳性率为40％。在8种复筛有效的植物样品中，南酸枣乙醇提取物对tsFT210细胞显示了很强的坏死性细胞毒，细胞凋亡诱导以及周期抑制等活性，是活性重现性好的植物品种。南酸枣系漆树科南酸枣属植物，又名酸枣树、酸醋树、五眼果树等，其树皮和果实入药。树皮主治疮疡、汤火伤、阴囊湿疹，鲜果则消食滞，治食滞腹痛，果核醒酒解毒，治风毒起疙瘩成疮或疡痈。干燥果实已作为中药“广枣”收入我国2000年版药典。南酸枣树皮的广谱抗菌作用及其抑菌成分和其他成分、果实的化学成分及抗血小板聚集活性成分等已有报道。南酸枣的抗肿瘤活性及活性成分迄今未见报道，因此，本文选择南酸枣作为深入研究的目标植物，对其抗肿瘤活性成分进行初步研究。本文首先通过微量快速活性跟踪分离预实验，先确定了植物材料的提取及制备有效部位的实验方案。据此，将大量植物材料用95％乙醇室温浸提，并将含水醇提取液减压浓缩至无醇味，然后依次用等量氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取获得了相应有机溶剂萃取物和水层残留物。其中氯仿萃取物主要富集了细胞毒和细胞凋亡诱导活性成分；正丁醇萃取物主要富集了G2／M期抑制活性成分；乙酸乙酯萃取物则兼有前二者的活性，但是活性较弱；而水层残留物则无相关活性。本文着重对氯仿萃取物的相关活性成分进行了较为系统的跟踪分离、结构鉴定以及相关活性的初步评价等基础研究。通过利用各种色谱技术结合活性筛选对氯仿萃取物进行了活性成分的跟踪分离，结果从中分离得到15个单体化合物1～15。继而利用现代谱学(MS、HR-MS、UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、DEPT、NOE差谱、1H-1H COSY、HMQC、HMBC及CD)方法对所得化合物的化学结构进行了研究并阐明了他们的化学结构（见Fig-1中化合物1～15）。化合物1～4、6、7、9的相对立体结构根据NOE差谱的解析结果予以确定，化合物1、2、6、7的绝对构型则根据其CD谱中Cotton效应，利用八区律予以确定。在上述化合物1～15中，1～8为迄今未见文献报道的新化合物，其中化合物7为具有新骨架结构的Fig.1 Compounds Isolated from Choereospondias axillaries1 （new）: （2R,4R,5S）-2,4,5-trihydroxy-2-（Z-nonadec-14-enyl）-cyclohexanone2 （new）: （2S,4S,5S）-2,4,5-trihydroxy-2-（Z-nonadec-14-enyl）-cyclohexanone3 （new）: 4,5-dihydroxy-5-（Z-2-hydroxyl-nonadec-14-enyl）-cyclohex-2-enone4 （new）: 2-（Z-nonadec-14-enyl）-cyclohex-5-ene-1,2,4-triol5 （new）: 3a,7a-dihydroxy-2-（Z-heptadec-12-enyl）-2.3,3a,4-tetrahydro-（7a H）-benzofuran-5-one6 （new）: （1R,3S,5R,9S）-5,9-dihydroxy-3-（Z-heptadec-12-enyl）-2-oxa-bicyclo[3.3.1]nanan-7-one7 （new）: （1S,3R,5R,8R）-5-hydroxy-3-（Z-heptadec-12-enyl）-2,10-dioxa-tricyclo[3.2.2.13,8]decan-6-one.8 （new）: 4-（Z-2-hydroxynonadec-14-enyl）-benzene-1,2-diol9: 4,6-dihydroxy-6-（Z-nonadec-14-enyl）-cyclohex-2-enone10: pinocembrin11: naringenin12: chrysin13: tetradecyl E-ferulate14: dibutyl phthalate15: scopoletine新化合物，化合物1和2为含一个长链烃取代基的单环多取代饱和环己酮类化合物的首例报道；化合物9、10、12、13和15为首次从本属植物中分离得到。本文利用SRB法和流式细胞术法对各单体化合物的相关活性进行了初步评价。SRB法测试结果表明：化合物1～15对人大肠癌HCT-15细胞、人宫颈癌HeLa细胞、人卵巢癌A2780细胞和人乳腺癌MCF-7等人细胞具有较强的细胞增殖的抑制活性，表明具有一定的体外抗肿瘤作用。流式细胞术活性测试结果表明：化合物1～9在高浓度时对tsFT210细胞主要表现细胞凋亡诱导和坏死性细胞毒活性，在低浓度时则主要表现G0／G1期周期抑制活性；化合物10和11在高浓度时对tsFT210细胞呈现较弱的G2／M期抑制活性；化合物14在高浓度时具有坏死性细胞毒活性；而化合物12、13和15对tsFT210细胞则未检测到显著的相关活性。这些结果表明1～15可通过抑制细胞周期、诱发细胞凋亡或对癌细胞的直接杀伤性细胞毒活性来发挥其抑制人癌细胞增殖的抗肿瘤活性。综上，本论文从南酸枣（茎皮）中分离纯化得到了15个活性化合物（其中化合物1～8为迄今未见文献报道的新化合物），并经实验初步证实，这些化合物可通过抑制细胞周期、诱发癌细胞发生凋亡或对癌细胞的直接杀伤性细胞毒活性来发挥其抑制人癌细胞增殖的抗肿瘤作用。因此，本论文的化合物有可能开发成抗肿瘤药物用于肿瘤的治疗，也有可能作为诱发细胞凋亡或抑制细胞周期的低分子探针用于探索生命现象本质的生命科学研究中。

论文目录:

摘要

Abstract

缩略词表

引言

第一章南酸枣等20种中草药的抗癌活性复筛

第一节活性筛选模型

第二节样品的制备与活性筛选

第三节小结与讨论

第二章南酸枣抗肿瘤活性成分的跟踪分离

第一节植物材料、实验材料及试剂

第二节提取方法与有效部位的快速确定

第三节大量样品的提取及活性部位的制备

第四节氯仿萃取物中活性成分的跟踪分离

第五节小结与讨论

第三章单体化合物的结构解析

第一节新化合物的结构解析

1.1 两个饱和环己酮类新化合物

1.2 两个环己烯(烯酮和烯醇)类新化合物

1.3 两个双环酮类新化合物的结构解析

1.4 一个三环酮类新化合物的结构解析

1.5 一个芳香族长链脂肪醇类新化合物的结构解析

第二节已知化合物的结构鉴定

2.1 一个α,β不饱和环己酮类化合物的结构鉴定

2.2 三个黄酮类化合物的结构鉴定

2.3 其它三个芳香族化合物的结构鉴定

第三节小结与讨论

第四章单体化合物抗癌活性的初步评价

第一节流式细胞术对单体化合物的活性评价

1.1 样品配制及测试方法

1.2 实验结果

1.2.1 环己酮类及其衍生物活性测试结果

1.2.2 其它类化合物的活性测试结果

1.3 小结与讨论

第二节 SRB法对单体化合物的活性评价

2.1 实验原理和实验方法

2.2 实验结果

2.2.1 环己酮类化合物

2.2.2 其他已知化合物的活性测试结果

2.2.3 小结与讨论

第三节结论

结论

参考文献

已发表文章

致谢

附图

发布时间: 2006-12-14

参考文献

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南酸枣抗肿瘤活性成分的研究

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