结核分枝杆菌H37Ra预防小鼠结核病的实验研究

论文摘要

目的:1.通过结核分枝杆菌H37Ra体内生长特性初步探讨其毒力。2.研究H37Ra对巨噬细胞的活化能力。3. H37Ra诱导的细胞免疫应答及免疫保护效果的研究。方法:1.将H37Ra、BCG和H37Rv分别感染BALB/c小鼠,观察在体内的增殖、肺脏脏器重量指数及病理改变。2.将H37Ra和BCG分别感染BALB/c小鼠巨噬细胞,半定量RT-PCR检测感染6h和24h后细胞因子的基因表达。3. BALB/c小鼠随机分为3组:H37Ra组、BCG组和NS组,分别用H37Ra、BCG和NS皮内注射,免疫后第6w,做小鼠PPD迟发型超敏反应实验。4.第8w处死部分小鼠,流式细胞分析仪检测小鼠脾淋巴细胞亚群的变化;MTT法检测脾淋巴细胞的刺激指数（SI）;ELISA法检测小鼠脾淋巴细胞培养上清液中IFN-γ产生水平。5.免疫后第8w,用5×106CFU MTB毒株H37Rv经小鼠腹腔注射,4w后处死小鼠,取小鼠脾脏、肝脏和肺脏稀释匀浆分别接种于改良罗氏培养基,培养21d后计数CFU。6.测定小鼠脏器重量指数同时取肺组织做病理学检查。结果:1. H37Ra在小鼠脾脏、肺脏增殖显著慢于H37Rv（P<0.05）,较BCG稍快（P>0.05）;肺组织脏器重量指数显著低于H37Rv（P<0.05）,较BCG稍高（P>0.05）;病理检测可见:H37Ra组和BCG组肺组织无明显病理变化,而H37Rv病变明显。2. H37Ra能诱导巨噬细胞表达较多的IL-12和TNF-α。3. H37Ra免疫小鼠后能诱导显著的迟发型超敏反应,以24h为最佳观测时间。4. H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞的百分率为（41.63±1.68）%,显著高于NS对照组（38.44±1.87）%（P<0.05）;H37Ra免疫小鼠脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞及CD8+T细胞的百分率与BCG免疫小鼠比较差异无统计学意义。脾淋巴细胞SI、IFN-γ水平检测发现H37Ra免疫组显著高于NS对照组（P<0.05）;H37Ra免疫组略高于BCG免疫组。5.毒株攻击4w后,H37Ra组小鼠肺、脾、肝组织荷菌量与NS对照组比较分别下降0.954、1.228和0.883log10CFU,差异有显著性（P<0.05）。H37Ra组各脏器组织荷菌量与BCG组之间差异均无显著性（P>0.05）。6.组织病理分析发现:H37Ra组小鼠肺泡腔有少量浆液性渗出,肺泡间隔增厚,局部有巨噬细胞浸润和肉芽肿形成。BCG组小鼠肺泡结构完整,巨噬细胞的浸润略增加,肺泡壁略增厚。而NS对照组病变严重而广泛,肺泡腔内有明显的出血性渗出液,大部分肺泡壁肿胀、增厚,肺泡结构被破坏。结论:1. H37Ra在体内生长速度明显慢于H37Rv,稍快于BCG,初步表明H37Ra的毒力明显低于H37Rv,较BCG稍强,但对小鼠比较安全。2. H37Ra能有效激活巨噬细胞。3. H37Ra免疫小鼠后能产生较强的抗结核细胞免疫,能抵抗毒株H37Rv的攻击,免疫保护效果与BCG相近。

论文目录

• 符号说明
• 中文摘要
• 英文摘要
• 论文正文：结核分枝杆菌H37Ra 预防小鼠结核病的实验研究
• 前言
• 第一部分 结核分枝杆菌H37Ra 体内生长特性及对巨噬细胞的活化能力
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 第二部分 结核菌 H37Ra 在小鼠体内诱导的抗结核细胞免疫应答及免疫保护效果的研究
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 全文小结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢
• 攻读硕士期间文章发表情况