中国南方汉族激素耐药型肾病综合征儿童WT1基因突变分析

论文摘要

第一部分激素耐药型肾病综合征单卵孪生姐妹WT1基因突变分析目的分析1个南方汉族激素耐药型肾病综合征（SRNS）家系WT1基因突变及其特点。方法研究对象为1个南方汉族SRNS家系先证者及其单卵孪生姐姐、父母和大姐，对照人群为50例尿检正常的汉族成年人。取所有研究对象外周静脉血3mL，提取基因组DNA，PCR扩增WT1基因全部10个外显子及其周围的部分内含子序列，对PCR产物直接进行DNA序列测定。结果先证者临床表型为不完全型Denys-Drash综合征，其孪生姐姐临床表型为孤立性SRNS。在该对单卵孪生姐妹均检测出WT1基因1180C>T（R394W）杂合突变，在先证者父母及其大姐和50例对照人群未检测出1180C>T（R394W）杂合突变；此外，还在该对孪生姐妹检测出3个相同的WT1基因多态性—126C>T、903A>G和IVS7–32C>A。结论本研究在1个汉族SRNS家系临床表型不同的单卵孪生姐妹患儿发现了相同的WT1基因R394W杂合突变。第二部分中国汉族散发性孤立性激素耐药型肾病综合征女性患儿WT1基因突变分析目的分析14例汉族散发性孤立性激素耐药型肾病综合征（ISRNS）女性患儿WT1基因突变及其特点。方法研究对象为14例汉族散发性ISRNS女性患儿（已除外NPHS2基因突变），对照人群为38例汉族散发性ISRNS男孩和50例尿检正常的汉族成年人。取所有研究对象外周静脉血3mL，提取基因组DNA，PCR扩增WT1基因外显子8和9及其周围的部分内含子序列，对PCR产物直接进行DNA序列测定。结果对14例汉族散发性ISRNS女性患儿进行WT1基因突变检测，结果在1例散发性ISRNS女孩患儿检测出WT1基因IVS9+5G>A杂合变异，该变异在50例正常对照人群中未检测出。汉族散发性ISRNS女性患儿WT1基因突变检出率7.1%。结论中国汉族散发性ISRNS女性患儿存在WT1基因突变，提示对汉族散发性ISRNS女性患儿需进行WT1基因突变分析。第三部分1例汉族孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿WT1基因突变分析目的分析1例汉族孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿WT1基因突变及其特点。方法研究对象为1例汉族孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿，6.3岁发病，对照人群为110例尿检正常的汉族成年人。取所有研究对象外周静脉血3mL，提取基因组DNA，PCR扩增WT1基因全部10个外显子及其周围的部分内含子序列，对PCR产物直接进行DNA序列测定。结果在该患儿WT1基因外显子8检测出1051A>G杂合变异，但在110例正常对照人群中未检测出1051A>G变异，表明该变异为WT1基因突变。该突变导致WT1基因的编码蛋白WT1的第351位赖氨酸被谷氨酸取代，即K351E。经检索PUBMED文献数据库、单核苷酸多态性数据库和人类基因突变数据库已公布的WT1基因变异，证实1051A>G（K351E）为新发现的WT1基因突变。结论在1例6.3岁孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿检测出WT1基因突变，提示对孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿需进行WT1基因突变分析。

论文目录

• 中文摘要
• ABSTRACT
• 前言
• 1 激素耐药型肾病综合征单卵孪生姐妹 WT1 基因突变分析
• 1.1 材料
• 1.1.1 研究对象
• 1.1.2 标本收集
• 1.1.3 引物设计
• 1.1.4 主要仪器
• 1.1.5 主要试剂
• 1.2 方法
• 1.2.1 基因组 DNA 的提取与定量
• 1.2.1.1 基因组 DNA 的提取
• 1.2.1.2 紫外分光光度计基因组 DNA 的定量
• 1.2.2 引物配制
• 1.2.2.1 引物母液的配制
• 1.2.2.2 引物工作液的配制
• 1.2.3 PCR 扩增 WT1 基因的 10 个外显子
• 1.2.3.1 PCR 反应体系
• 1.2.3.2 PCR 反应条件
• 1.2.4 琼脂糖凝胶电泳进行 PCR 产物鉴定
• 1.2.4.1 琼脂糖凝胶的制备
• 1.2.4.2 PCR 产物鉴定
• 1.2.5 DNA 序列测定
• 1.2.6 DNA 序列分析
• 1.2.7 WT1 基因变异查新
• 1.3 结果
• 1.4 讨论
• 1.5 结论
• 2 中国汉族散发性孤立性激素耐药型肾病综合征女性患儿 WT1 基因突变分析
• 2.1 材料
• 2.1.1 研究对象
• 2.1.2 标本收集
• 2.1.3 引物设计
• 2.1.4 主要仪器
• 2.1.5 主要试剂
• 2.2 方法
• 2.2.1 基因组 DNA 的提取与定量
• 2.2.2 PCR 扩增 WT1 基因的外显子 8 和外显子 9
• 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳进行 PCR 产物鉴定
• 2.2.4 DNA 序列测定
• 2.2.5 DNA 序列分析
• 2.2.6 WT1 基因变异位点查新
• 2.2.7 散发性 ISRNS 女性患儿性别鉴定
• 2.3 结果
• 2.3.1 52 例散发性 ISRNS 患儿的临床病理特点
• 2.3.2 52 例散发性 ISRNS 患儿 WT1 基因检测
• 2.3.3 散发性 ISRNS 女性患儿性别鉴定
• 2.4 讨论
• 2.5 结论
• 3 1 例汉族孤立性肾病综合征伴肾衰竭男性患儿 WT1 基因突变分析
• 3.1 材料
• 3.1.1 研究对象
• 3.1.2 标本收集
• 3.1.3 引物设计
• 3.1.4 主要仪器
• 3.1.5 主要试剂
• 3.2 方法
• 3.2.1 基因组 DNA 的提取与定量
• 3.2.2 PCR 扩增 WT1 基因的 10 个外显子
• 3.2.3 琼脂糖凝胶电泳进行 PCR 产物鉴定
• 3.2.4 DNA 序列测定
• 3.2.5 DNA 序列分析
• 3.2.6 WT1 基因变异位点查新
• 3.3 结果
• 3.4 讨论
• 3.5 结论
• 参考文献
• 附录
• 成果
• 致谢
• 综述
• 参考文献
• 附表