论文摘要
目的研究色原底物培养基难鉴定临床感染相关酵母菌的分子生物学鉴定方法及体外药物敏感性,为临床提供一些治疗方面参考信息。探索基于重复序列分析的一种新的方法（DiversiLab系统）在酵母菌鉴定及分型方面的应用,为酵母菌感染实验室快速诊断提供帮助。方法1.收集临床标本中分离到的色原底物培养基难鉴定的酵母菌,采用ITS区和D1/D2区的序列综合分析得到准确的鉴定结果,同时采用常规鉴定方法Vitek酵母菌鉴定卡和API20C鉴定,并将结果进行比较。2.采用Etest法对这些酵母菌进行了6种抗真菌药物的体外敏感试验。3.采用DiversiLab系统对部分酵母菌进行rep-PCR并分析其产物创建树状图,使用Classification功能将测试菌株图谱与DiversiLab自带参考数据库样品图谱相比较进行鉴定,使用Typing功能获得菌株之间的相似性数据。结果1.采用ITS和D1/D2区双位点序列比对分析,5株标准菌株均正确鉴定到种水平；71株临床菌株中,鉴定共有19个种,新型隐球菌最多（17/71,23.9%）,其次是近平滑念珠菌（14/71,19.7%）和光滑念珠菌（10/71,14.1%）。商品试剂盒API20CAUX和Vitek2Compact YST鉴定结果正确的百分率分别为81.7%（58/71）和73.2%（52/71）。2.所有测试菌株除了5株阿萨希毛孢子菌外体外均对两性霉素B敏感。三唑类药物对这些酵母菌的MIC分布范围较宽,其中伏立康唑体外敏感性最好（MIC90为0.25μg/m1）,氟康唑敏感性较低（MIC90为16μg/ml）。除对棘白菌素类天然耐药的新型隐球菌和毛孢子菌属外,大多数菌株对卡泊芬净敏感。3.26株临床菌株及5株标准菌株采用DiversiLab系统Classification分析中的Top Match功能进行鉴定,除2株季也蒙念珠菌鉴定错误,其余全部正确。13株近平滑念珠菌及标准菌株ATCC22019之间相似度在95%以上,它们和拟平滑念珠菌、似平滑念珠菌的相似度均低于75%。10株新型隐球菌之间的相似度在92%以上。结论采用ITS区及D1/D2区序列分析可有效鉴定临床相关的多种酵母菌。不同酵母菌之间药敏谱存在很大差异,临床实验室在常规工作中除了要重视酵母菌的准确鉴定外,还应重视对临床酵母菌分离株的体外药敏试验。DiversiLab系统可用于实验室流行病学分型研究,数据库仍待完善,应用于临床菌株鉴定仍需进一步深入研究。