论文摘要
第一部分新生大鼠嗅鞘细胞的分离、培养和纯化研究目的探讨新生大鼠嗅鞘细胞的分离、培养和纯化方法,为后期的基因修饰嗅鞘细胞修复视神经损伤研究奠定基础。方法取2d内的新生大鼠嗅球组织,在解剖显微镜下分离取材,原代培养嗅鞘细胞,运用差速贴壁法和差速贴壁+阿糖胞苷+细胞生长刺激因子法两种方法进行纯化,在倒置显微镜下观察不同培养时间嗅鞘细胞的形态、数量和NGFRp75抗体免疫荧光结果,统计嗅鞘细胞的纯度。结果嗅鞘细胞的纯度分别是差速贴壁组平均为60.41%±4.32%,差速贴壁+阿糖胞苷+细胞生长刺激因子法组平均为84.98%±4.03%。两组数据用t检验进行统计学分析,差异有统计学意义（P<0.05）。结论取材于新生大鼠,显微镜下分离脑膜,差速贴壁+阿糖胞苷+细胞生长刺激因子法纯化,都是良好的嗅鞘细胞培养方法。第二部分大鼠NEP1-40基因的扩增及重组慢病毒载体的构建目的构建携带大鼠NEP1-40目的基因的重组慢病毒,并检测其体外表达目的基因的能力。方法PCR扩增出TAT/NEP1-40编码片段,定向克隆入pLV.Des2d.P/puro载体,Lipofectamine2000转染293FT细胞包装携带NEP1-40目的基因的重组慢病毒,测序证实为TAT/NEP1-40后大量扩增,以基因转移单位（GTU）法测定病毒滴度,运用PCR和western blot分别检测NEP1-40在293FT细胞中转录水平和蛋白水平的基因表达。结果成功构建携带大鼠NEP1-40目的基因的重组慢病毒,并证实其在293FT细胞中可表达NEP1-40。结论携带大鼠NEP1-40基因的重组慢病毒可在体外表达其目的基因,为研究NEP1-40在视神经损伤恢复中的作用奠定基础。第三部分慢病毒介导的NEP1-40基因在体外嗅鞘细胞中的表达目的研究慢病毒介导的NEP1-40基因在体外嗅鞘细胞中的表达,并初步观察转染了NEP1-40基因的嗅鞘细胞对视网膜节细胞的作用。方法用NEP1-40慢病毒载体转染体外原代培养嗅鞘细胞,应用PCR及ELISA检测NEP1-40基因在嗅鞘细胞中转录水平和蛋白水平的表达,并将转基因嗅鞘细胞与视网膜神经节细胞共培养,观察节细胞轴突的生长情况。结果NEP1-40慢病毒载体转染体外原代培养嗅鞘细胞后经过PCR和ELISA检测,在转录水平和蛋白表达水平证实NEP1-40基因均有表达,转基因嗅鞘细胞与视网膜神经节细胞共培养时观察到节细胞生长状况良好。结论NEP1-40重组慢病毒载体可以转染体外原代培养嗅鞘细胞,并能在细胞外表达其目的基因,促进视网膜神经节细胞生长,为后期动物实验奠定基础。
论文目录
相关论文文献
- [1].NGR-单壁碳纳米管-紫杉醇复合物的制备及其靶向性研究[J]. 中国药学杂志 2013(20)
- [2].NGR多肽修饰的9-硝基喜树碱隐形脂质体药剂学性质与抗肿瘤作用研究[J]. 中国现代应用药学 2015(05)
- [3].神经干细胞分化过程中NgR表达的变化[J]. 中国现代医学杂志 2008(16)
- [4].NgR基因沉默骨髓间充质干细胞/许旺细胞支架复合体的构建[J]. 中国组织工程研究 2012(25)
- [5].新生血管靶向肽NGR与肿瘤靶向治疗[J]. 生命的化学 2011(01)
- [6].脊髓损伤局部表达NgR的巨噬细胞的体外分离培养[J]. 脊柱外科杂志 2009(04)
- [7].抑制NGR对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的保护作用[J]. 江苏医药 2013(07)
- [8].A preliminary study on the interaction between Asn-Gly-Arg(NGR)-modified multifunctional nanoparticles and vascular epithelial cells[J]. Acta Pharmaceutica Sinica B 2017(03)
- [9].NGR修饰唑来膦酸长循环脂质体制备及其表征研究[J]. 浙江中西医结合杂志 2020(11)
- [10].大鼠脊髓损伤后NgR在巨噬细胞中的表达对其吞噬作用及神经再生的影响[J]. 脊柱外科杂志 2010(05)
- [11].经NGR肽段遗传修饰的携带三种报告基因的腺病毒载体的构建及其实验研究[J]. 中国生物工程杂志 2011(04)
- [12].电针对高血压大鼠皮层脑梗死延髓与脊髓NgR表达的影响[J]. 中国中西医结合杂志 2014(03)
- [13].NGR修饰的香豆素-6隐形脂质体的制备及其体外细胞摄取性质[J]. 中国医院药学杂志 2014(06)
- [14].NgR特异性siRNA筛选及其慢病毒表达载体构建[J]. 中国伤残医学 2013(07)
- [15].神经干细胞NgR基因沉默立体定向移植治疗大鼠脑损伤[J]. 中国组织工程研究与临床康复 2010(14)
- [16].Nogo-A及NgR在墨西哥钝口螈脑组织中的表达及意义[J]. 热带医学杂志 2014(01)
- [17].RNA干扰神经干细胞中NgR基因的表达修复大鼠面神经缺损的体外实验研究[J]. 临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2014(10)
- [18].夹脊电针对脊髓损伤大鼠巨噬细胞NgR蛋白表达的影响[J]. 中国中医药科技 2020(04)
- [19].RNA干扰对离体大鼠神经干细胞NgR基因表达的影响[J]. 中国组织化学与细胞化学杂志 2008(01)
- [20].夹脊电针干预对大鼠脊髓损伤区巨噬细胞NgR表达的影响[J]. 中国中医药科技 2020(01)
- [21].Nogo蛋白受体(NgR)基因沉默对糖尿病大鼠视网膜神经节细胞密度及突触素表达的影响[J]. 眼科新进展 2017(02)
- [22].NgR介导的氧化应激反应在葡萄糖诱导RGC凋亡中的作用[J]. 国际眼科杂志 2017(02)
- [23].脊髓康对脊髓损伤大鼠Nogo-66受体NgR表达的影响[J]. 中国组织工程研究 2016(18)
- [24].Nogo-A及其受体NgR对中枢神经系统损伤后修复的影响[J]. 中国医药导报 2012(01)
- [25].RNA干扰抑制NgR表达对脑梗死大鼠皮质脊髓束可塑性的影响[J]. 卒中与神经疾病 2013(05)
- [26].NGR和RGD配体修饰脂质体对人脐静脉内皮细胞靶向效果的比较(英文)[J]. Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2009(02)
- [27].慢性脑缺血大鼠Nogo-A和NgR表达的变化[J]. 江苏医药 2008(01)
- [28].骨髓间充质干细胞移植影响慢性脑缺血大鼠认知功能及海马区Nogo-A、NgR的表达[J]. 中国组织工程研究 2012(10)
- [29].视神经横断对大鼠下丘脑视上核神经元Nogo-A/B及NgR表达的影响[J]. 解放军医学杂志 2008(09)
- [30].OMgp及其受体NgR在大鼠中枢神经系统发育中的表达[J]. 成都医学院学报 2010(04)
标签：新生大鼠论文; 嗅鞘细胞论文; 培养论文; 纯化论文; 分离论文; 慢病毒载体论文; 基因表达论文; 基因论文; 重组慢病毒论文; 视网膜神经节细胞论文;