论文题目: 系统性红斑狼疮造血干/祖细胞异常及免疫调节治疗的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 内科学
作者: 陈志营
导师: 毕黎琦
关键词: 造血干细胞,细胞,集落形成,分化,治疗
文献来源: 吉林大学
发表年度: 2005
论文摘要: 本研究针对SLE 是否是造血干细胞病这一学术界关注的热点问题展开,研究雄性BXSB 狼疮鼠骨髓造血细胞集落形成、骨髓基质细胞对造血的调控作用、骨髓中B 细胞分化抗原及干细胞抗原的表达,并探讨地塞米松和环磷酰胺治疗对上述指标的影响。同时,对SLE 患者外周血中9 种B细胞分化抗原的表达进行检测。结果显示,已发病的雄性BXSB狼疮鼠骨髓CFU-GM、CFU-E、CFU-MK数量均增加,骨髓中各分化阶段B 细胞数量增多,但骨髓基质细胞对CFU-GM 的调控作用无异常。地塞米松及环磷酰胺治疗使上述异常在一定程度上得到纠正,但未能达到正常水平。SLE 患者PBMC 中CD19、CD20、sIgM 和sIgG 的表达与正常人无明显差别,而CD10、CD23、CD138 和sIgD在活动期SLE 患者表达明显高于正常人,CD21 则显著低于正常人。本研究的创新之处在于,建立了甲基纤维素半固体培养体系中CFU-GM 的原位染色方法,并首次对BXSB 小鼠骨髓基质细胞功能及骨髓CFU-E、CFU-MK 的形成进行了研究,系统地探讨了地塞米松和环磷酰胺对BXSB 小鼠骨髓三系集落形成及骨髓中B 细胞分化的影响,并对SLE 患者外周血中B 细胞分化抗原表达进行了较系统研究。发现BXSB 狼疮鼠骨髓三系造血干/祖细胞增生异常,狼疮鼠及SLE 患者B 细胞增生、分化、活化过程均有异常,支持SLE 是造血干细胞病这一论点,并提示自体干细胞移植不能根治SLE,而异基因造血干细胞移植可能是治疗SLE 的有效途径。本研究为深入探讨SLE 发病机理和临床治疗策略的选择提供了实验依据。本研究选题来源于国家自然科学基金资助项目(系统性红斑狼疮造血干细胞异常及免疫调节研究30170887 2002.1~2004.12)。
论文目录:
英文缩写词表
前言
一、系统性红斑狼疮造血干/祖细胞研究现状及存在的问题
(一) SLE 造血干/祖细胞增生分化异常
1.S LE 的造血干/祖细胞集落形成异常
2.S LE 造血干/祖细胞异常的发生机理
(1) 造血干/祖细胞基因表达异常
(2) 造血干/祖细胞增生分化的环境发生改变
(3) 自身抗体抑制造血干/祖细胞增殖
(4) 淋巴细胞对SLE 骨髓集落形成单位的影响
3. SLE动物模型中造血干/祖细胞的研究
4. 造血干/祖细胞增生分化异常与 SLE 发病的关系
(二) SLE B 细胞异常的研究
1. 正常 B 细胞的分化
2. SLE B 细胞增生分化异常
(1) SLE B 细胞异常的表现
(2) SLE B 细胞异常的发生机理
(三) SLE 免疫调节治疗的研究概况
1. 免疫调节治疗对骨髓造血功能的影响
2. 免疫调节治疗对 B 细胞增生分化的影响
3. 免疫调节治疗对细胞因子的影响
4. 免疫调节治疗的其他作用
二、本研究的目的、研究范围及意义
研究工作
第一部分 BXSB 狼疮鼠造血功能异常的实验研究
一、材料与方法
(一) 实验材料
1. 实验动物
2. 主要仪器
3. 主要试剂
4. 实验试剂配制
(二) 实验内容
1. 造血干/祖细胞体外集落培养条件的摸索
2. 不同周龄雄性 BXSB 小鼠尿蛋白、外周血白细胞计数和分类的检测及骨髓集落培养
3. 骨髓基质细胞对粒-巨噬细胞集落形成的影响
4. B细胞分化抗原的检测
(三) 研究方法
1. 尿蛋白测定采用考马斯亮蓝法
2. 外周血白细胞计数及分类
3. 脾指数的测定
4. 骨髓单个核细胞的分离
5. 台盼蓝排除法细胞活力鉴定
6. 集落培养
7. 基质细胞培养
8. 流式细胞仪检测
(四) 统计方法
二、结果
(一) 小鼠骨髓细胞体外集落培养条件摸索的结果
1. 小鼠骨髓各系造血细胞体外集落培养最佳时间的确定
2. 不同集落刺激因子浓度对骨髓集落形成的刺激作用
(二) BXSB 小鼠尿蛋白及外周血白细胞、单核细胞检测结果
1. 不同周龄小鼠尿蛋白含量的变化
2. 不同周龄小鼠外周血白细胞及单核细胞计数
(三) BXSB 小鼠 BMMC 集落培养结果
1. 集落形态观察
2. 不同周龄 BXSB 小鼠骨髓各系集落形成单位
3. 骨髓基质细胞对 CFU-GM 集落形成的作用
(四) 骨髓细胞分化抗原表达的研究结果
1. 骨髓中 B 细胞分化抗原的变化
2. 干细胞抗原(Sca-1)表达的变化
三、讨论及本研究创新之处
(一) 雄性 BXSB 小鼠骨髓造血细胞集落形成异常
(二) 骨髓基质细胞功能的研究
(三) BXSB 小鼠骨髓 B 细胞分化抗原及干细胞抗原的表达
1. 骨髓 B 细胞分化抗原的表达情况
2. 骨髓干细胞抗原的表达情况
第二部分 免疫调节治疗对狼疮鼠造血功能及各项异常指标的影响
一、材料与方法
(一) 实验动物
(二) 主要试剂及仪器
(三) 给药方法
(四) 检测指标
二、结果
(一) 治疗后 BXSB 小鼠尿蛋白及脾指数的变化
(二) 治疗后 BXSB 小鼠骨髓集落形成的变化
(三) 治疗后 BXSB 小鼠 B 细胞分化抗原表达的变化
(四) 治疗后干细胞抗原表达的变化
三、讨论及本研究创新之处
(一) 免疫治疗对雄性 BXSB 小鼠病情的影响
(二) 免疫治疗对雄性 BXSB 小鼠骨髓集落形成的作用
(三) 免疫治疗对雄性 BXSB 小鼠骨髓 B 细胞分化抗原及干细胞抗原的作用
第三部分 SLE 患者外周血 B 系细胞分化抗原表达的研究
一、材料与方法
(一) 病例选择及分组
(二) 主要试剂和仪器
(三) 实验方法
(四) 统计方法
二、结果
三、讨论
结论
参考文献
攻读博士学位期间发表的文章
致谢
中文摘要
英文摘要
发布时间: 2005-08-26
参考文献
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