论文摘要
第一部分藤黄酸抑制类固醇激素受体共活化因子3及Akt通路介导慢性粒细胞白血病急变K562细胞株G0／G1期阻滞和凋亡目的：研究藤黄酸抗白血病的影响及其分子机制，为其临床应用提供理论基础。方法：采用MTT比色法检测K562细胞的增殖活性，Annexin V-FITC／PI双标法检测细胞凋亡及透射电镜分析细胞凋亡形态学的改变，流式细胞术分析细胞周期改变，Realtime-PCR检测藤黄酸对K562细胞内SRC-3和Bcl-2基因表达的影响，Western blot法检测藤黄酸对K562细胞内SRC-3，Akt，pAkt，核糖体蛋白S6激酶1（S6K1），pS6K1，糖原合成激酶3β（GSK-3β），pGSK-3β和Bcl-2蛋白表达的影响。结果：（1）藤黄酸以剂量、时间依赖性方式抑制K562细胞的增殖，其24 h的IC50是1．9±0．1μmol／L。（2）藤黄酸以剂量依赖性方式诱导K562细胞凋亡，伴有典型的凋亡细胞形态学改变。（3）藤黄酸阻滞K562细胞周期于G0／G1期。（4）藤黄酸能以剂量依赖性方式抑制SRC-3，pAkt，pS6K1，pGSK-3β和Bcl-2表达水平，而Akt，S6K1和GSK-3β总蛋白水平不受影响。结论：藤黄酸发挥其抗白血病效应可能与下调类固醇激素受体共活化因子3（SRC-3）的表达有关。第二部分鱼藤素抑制类固醇激素受体共活化因子3及NF-κB通路介导急性淋巴细胞白血病Jurkat细胞凋亡目的：研究鱼藤素抗白血病的影响及其分子机制，为其临床应用提供理论基础。方法：采用MTT比色法检测Jurkat细胞的增殖活性，原位细胞凋亡检测技术（TUNEL）及透射电镜分析细胞凋亡形态学的改变，流式细胞术分析细胞周期改变，RT-PCR和Westem blot法检测鱼藤素对白血病细胞内SRC-3，NF-κB，Bcl-2，Bcl-xL基因和蛋白表达的影响。结果：（1）鱼藤素以剂量、时间依赖性方式抑制Jurkat细胞的增殖，其24 h的IC50是43．73±0．35 nmol／L，48h的IC50为28．96±0．29 nmol／L。（2）鱼藤素以剂量依赖性方式诱导Jurkat细胞凋亡。40 nmol／L的鱼藤素处理24 h后透射电镜观察到细胞染色质浓缩，核碎裂，典型凋亡小体形成。TUNEL法检测到TUNEL阳性细胞，40 nmol／L的鱼藤素处理24 h后TUNEL阳性细胞百分比为12．8±0．85％，与对照组（1．1±0．09％）相比有统计学意义（P＜0．01）；（3）鱼藤素阻滞Jurkat细胞周期于G0／G1期。（4）鱼藤素能同时在蛋白和基因水平，以剂量依赖性方式抑制SRC-3及其相关基因NF-κB和其下游的抗凋亡蛋白Bcl-2，Bcl-xL的表达。结论：鱼藤素能明显抑制Jurkat白血病细胞的增殖，并诱导其凋亡，其抗白血病效应可能与下调类固醇激素受体共活化因子3（SRC-3）的表达有关。第三部分鱼藤素对多发性骨髓瘤细胞类固醇激素受体共活化因子3的调节作用目的：研究鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI-8226细胞抗增殖影响及其分子机制。方法：采用MTT比色法检测鱼藤素对RPMI-8226细胞增殖活性的影响，Annexin-VFITC／PI双标法及Hoechst33258分析细胞凋亡形态学的改变，肿瘤细胞侵袭实验检测鱼藤素对RPMI-8226细胞侵袭作用的影响，RT-PCR法检测鱼藤素对SRC-3和NF-κB基因表达的影响，免疫组化法检测鱼藤素对SRC-3和NF-κB蛋白的影响和分布情况，明胶酶法用来检测RPMI-8226细胞分泌MMP-2和MMP-9酶的活性。结果：（1）鱼藤素能明显抑制RPMI 8226细胞的增殖，其24 h的IC50是54．55±0．40nmol／L。（2）鱼藤素以剂量依赖性方式诱导RPMI-8226细胞凋亡，伴有典型的凋亡细胞形态学改变。（3）鱼藤素能以剂量依赖性方式抑制RPMI-8226细胞侵袭。（4）鱼藤素能同时在蛋白和基因水平抑制SRC-3及其相关基因NF-κB，从而下调MMP-2和MMP-9酶的活性。结论：鱼藤素发挥其抗多发性骨髓瘤效应可能与下调SRC-3的表达有关。
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