论文摘要
第一部分参附注射液对成年豚鼠在体心室肌细胞跨膜动作电位的影响目的探讨参附注射液（Shenfu Injection，SFI）对成年豚鼠在体心室肌细胞跨膜动作电位的影响。方法随机选取健康成年豚鼠10只，分为两组（n=5）：生理盐水组（C组）和SFI组（S组）。两组分别给予生理盐水、SFI(15ml·kg-1，i．p．)处理。采用悬浮式微电极技术检测在体心室肌细胞TAP如下指标的变化：动作电位振幅（TAP amplitude，TAPA）、0期最大去极化速率(maximum velocity，Vmax)、动作电位复极10％、50％及90％时程（10％、50％、90％of action potential duration，APD10、APD50、APD90）、静息电位（rest potential，RP）、超射值（over shoot，OS）等。以配对t检验及方差分析（analysis of variance，ANOVA）等进行统计处理。结果S组豚鼠处理后在体心室肌细胞TAPA由（76.8±5.4）mV降至（69.0±5.3）mV（P＜0.05），Vmax由（208±14）V·s-1降至（189±12）V·s-1（P＜0.01）；C组处理后TAPA由（77.1±9.2）mV变为（78.2±10.5）mV（P＞0.05），Vmax由（208±49）V·s-1变为（203±40）V·s-1（P＞0.05）。两组组间比较时，两指标差异均有统计学意义：TAPA，P＜0.01；Vmax，P＜0.05。而APD10、APD50、APD90、RP、OS等指标的两组组内及组间差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论SFI能减小豚鼠在体心室肌细胞跨膜动作电位0期去极化幅度、减慢其速率，从而发挥相应电生理效应。第二部分参附注射液及其主要成分的快钠通道效应目的排除在体干扰因素（神经、体液等）影响下，以离体细胞为对象，以SFI主要成分作对比，从分子水平观测SFI等对心室肌细胞膜快钠通道的直接作用，探讨SFI的心肌电生理效应的离子通道机制及药效的成分基础。方法采用急性酶解法分离获取豚鼠左心室肌细胞，随机选取30个，分为5组（n=6）：S、F、H、D、A组，分别给予10％SFI、10％附子有效成分（fuzi active ingredient，FZAI）、10％红参有效成分（hongshen active ingredient，HSAI）、10mmol·L-1去甲乌药碱（demethylcoclaurine，DMC）、10％辅料空白对照物处理。以全细胞膜片钳技术在电压钳模式下观测各组处理前后胞膜快钠通道电流(INa)的变化。随机选取12个细胞，分为2组（n=6）：S、F组，分别以1.25％、2.5％、5％、10％、15％的浓度累积方式给予SFI或FZAI，用前述方法观测药物对INa作用的量效关系。另随机选取12个细胞，分为2组（n=6）：S、F组，分别给予10％SFI或10％FZAI处理。以前述方法观测各组处理前后快钠通道动力学（失活、失活后复活）相关各预设方案下钠电流的变化，进行相应曲线拟合等处理。以t检验及单因素、重复测量ANOVA、q检验等进行统计分析。结果S、F两组各自用药前后峰值电位下INa电流密度组内比较差异均有统计学意义（P＜0.01），而H、D、A各组组内比较差异无统计学意义（P＞0.05）。S、F两组间比较及两组分别与H、D、A组比较，差异均有统计学意义（P＜0.01），而H、D、A各组两两比较差异无统计学意义（P＞0.05）。S、F组药物均浓度依赖性地降低INa电流密度，在1.25％、2.5％、5％、10％、15％的药物浓度下各抑制率两两比较：每组在10％与15％的药物浓度下抑制率比较差异均无统计学意义（P＞0.05），S组其余各比较差异均有统计学意义（P＜0.01），F组其余各比较差异亦均有统计学意义（除1.25％与2.5％浓度下抑制率比较P＜0.05外，其余均P＜0.01）。用Hill方程拟合得：S组药物对INa电流密度的最大抑制率(Emax)为（22.21±1.15）％，半数药效浓度(EC50)为（2.98±0.25）％；F组药物的Emax为（19.62±2.81）％，EC50为（4.04±0.35）％。两组Emax差异无统计学意义（P＞0.05），但EC50差异具有统计学意义（P＜0.01）。S、F组用药后INa的电流-电压曲线均上移（但激活电位、峰值电位、反转电位等曲线特征无变化）：两组用药前各电压水平下电流密度差异无统计学意义（P＞0.05）；S组用药前后在-40 mV、-30mV、-20 mV、-10 mV、0mV、15mV、30mV电压水平下电流密度差异有统计学意义（后二者P＜0.05，其余P＜0.01），而-50 mV、-45 mV时无统计学意义（P＞0.05）；F组用药前后在-45 mV、-40 mV、-30 mV、-20 mV电压水平下电流密度差异有统计学意义（-20 mV时P＜0.05，其余P＜0.01），而其余各电压水平下无统计学意义（P＞0.05）。快钠通道动力学指标检测中，S、F组处理后较处理前通道失活曲线均左移、复活曲线均右移。拟合后特征参数各组用药前后比较：失活曲线的K值差异无统计学意义（P＞0．05），V1／2及复活曲线的τ值差异均有统计学意义（P＜0．05）。而两组间各指标差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论SFI能直接阻滞胞膜快钠通道电流，促进通道失活，延缓其复活过程，可能是其相应电生理效应及抗快速性心律失常等心脏保护性效应的机制之一；该效应源于其中FZAI，但该成分代表性单体DMC单独应用无效，不排除单体在复方中的作用；复方SFI的效应较FZAI强，更具疗效优势。