粘虫幼虫肠道细菌群的分子鉴定

论文摘要

粘虫Mythimna separata隶属鳞翅目夜蛾科昆虫,是农药毒理研究中的重要试虫。昆虫肠道微生物在其生理生化、免疫、抵抗疾病和解毒等方面起着重要作用。昆虫肠道菌群组成的变化可以部分反映机体的生理功能和肠道微生态环境对农药的反应状况。因此,本研究以16S rDNA为基础,通过文库序列分析、PCR-DGGE技术和传统分离培养与分子鉴定相结合3种方法对粘虫幼虫肠道细菌群落的组成及其多样性进行了研究,旨在为研究农药对昆虫肠道菌群的影响提供可以借鉴的依据。实验结果：①传统分离培养和分子鉴定相结合的方法,得到葡萄球菌属Staphylococcus、芽孢杆菌属Bacillus、节杆菌属Arthrobacter、肠球菌属Enterococcus的细菌9种,,其中葡萄球菌属为优势菌群,优势种是腐生葡萄球菌Staphylococcus saprophyticus。②构建基因文库得到埃希式杆菌属Escherichia、变形杆菌属Beta proteobacterium、假单胞杆菌属Pseudomonas、苍白杆菌属Ochrobactrum、罗尔斯顿菌属Ralstoni、肠球菌属Enterococcus,其中优势菌群是埃希式杆菌属,优势种是大肠杆菌Escherichia coil。③PCR-DGGE得到5个已知属的细菌,分别是埃希氏杆菌属Escherichia、葡萄球菌属Staphylococcus、泛生菌属Pantoea、肠球菌属Enterococcus和假单胞杆菌属其中优势菌群是肠球菌属Pseudomonas。和假单胞杆菌属Enterococcus优势种是绿脓假单胞杆菌Pseudomonas,和蒙氏肠球菌Pseudomonas aeruginosa结论：构建基因文库的方法得到粘虫幼虫肠道细菌种类较其他两种方法多,即文库Enterococcus mundtii。序列显示的细菌多样性比和传统培养方法高,但是每一种方法得到的细菌种类并DGGE不完全一致,如节杆菌属只在培养过程中检测到,罗尔斯顿菌属只在克隆文库方法中得到,泛生菌属只在E中检测到。另外,培养方法、克隆文库及PCR-DGG分离技DGGE术得到细菌种类及优势菌并不一致,我们推测这些现象的出现主要与每种方法自身的优缺点有关,所以在昆虫肠道细菌多样性研究中多种方法综合使用,更能够揭示肠道细菌组成及其多样性。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 粘虫概述
• 1.1.1 粘虫生物学特性
• 1.1.2 粘虫危害及防治措施
• 1.1.3 粘虫的应用
• 1.2 昆虫肠道微生物
• 1.2.1 肠道微生物种类及其作用
• 1.2.2 昆虫肠道微生物研究进展
• 1.3 昆虫肠道微生物研究方法简介
• 1.3.1 肠道细菌的传统培养方法
• 1.3.2 肠道细菌的分子生物学研究方法
• 1.4 研究的目的意义及创新点
• 1.4.1 目的意义
• 1.4.2 本研究的创新点
• 1.5 研究内容及技术路线
• 1.5.1 研究内容
• 1.5.2 技术路线
• 第二章 粘虫幼虫肠道细菌群的分子鉴定
• 2.1 粘虫肠道细菌的传统培养和分子鉴定
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 实验方法
• 2.1.3 结果分析
• 2.1.4 小结
• 2.2 粘虫幼虫肠道细菌的16S rDNA文库
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 实验方法
• 2.2.3 结果分析
• 2.2.4 小结
• 2.3 粘虫幼虫肠道细菌的PCR-DGGE鉴别
• 2.3.1 实验材料
• 2.3.2 实验方法
• 2.3.3 结果分析
• 2.3.4 小结
• 第三章 讨论
• 3.1 粘虫幼虫肠道细菌的三种鉴别方法的比较
• 3.2 粘虫幼虫肠道细菌多样性
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介