贺州市猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查及防控

论文摘要

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome, PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV）引起以怀孕母猪的生殖障碍和生长猪及仔猪的严重呼吸道疾病为特征的一种高度接触性及免疫抑制性传染病,与猪瘟、猪口蹄疫一起被列为危害世界养猪业的三大传染病之一,对世界各国的养殖业造成巨大的经济损失。为调查贺州市猪繁殖与呼吸综合征病毒的流行动态,2006年9月至2007年12月间,应用RT-PCR技术,对广西贺州市以发热、咳嗽、呼吸困难、皮肤及耳朵发绀和高发病率及高病死率等为主要临床特征的39个发病猪场所采集的53份病料进行了PRRSV等主要病原检测。检测结果表明：PRRSV阳性30份,阳性率56.60%（30/53）。这其中,PRRSV NSP2变异株阳性20份,占到总的PRRSV阳性的66.7%。调查发现,贺州市PRRSV与其它病原的混合感染较严重,（PRRSV+PCV-2）二重感染所占比率为39.62%（21/53）,（PRRSV+SIV）二重感染所占比率32.07%（17/53）,（PRRSV+PCV-2+SIV）三重感染所占比率30.19%（16/53）。为调查贺州市猪繁殖与呼吸综合征变异株流行动态,了解贺州市PRRSV流行株的分子遗传变异情况。扩增贺州市PRRSV变异毒株的部分NSP2基因,克隆并测序,成功获得9株PRRSV变异株部分NSP2基因序列,并与参考株进行核苷酸序列及推导的氨基酸比对分析,结果表明：9条PRRSV变异株部分NSP2序列之间核苷酸的同源性为94.7%-99.6%,推导氨基酸的同源性为73.5%-98.9%；与国内代表毒株序列相比核苷酸同源性为80.5%-99.4%（其中与JXA1的同源性最高,为98.4%-99.4%）,推导氨基酸同源性为55.5%-93.2%。本研究获得的9条PRRSV变异株部分NSP2序列推导的氨基酸均存在“1+29”的的经典缺大,与典型的高致病性的PRRSV序列特征相同。扩增贺州市PRRSV的变异毒株的ORF5基因,克隆并测序,成功获得10株PRRSV变异株ORF5基因序列,10株ORF5基因序列核苷酸同源性为95.7%-99.8%,氨基酸同源性为93.5%-99.0%；与国内代表毒株序列核苷酸同源性为94.2%-99.7%,氨基酸同源性为92.0%-99.5%；所获得10株PRRSV GP5氨基酸第13位和第151位均为R,由此可见本研究所获得的贺州市10株PRRSV都具有强毒株的特征；PRRSVGP5蛋白的第34位氨基酸是决定病毒否为准种的关键,本研究所获得的10株PRRSV毒株GP5的34位氨基酸均由D变异为N,与CH-1a、HB-1、JXA1等国内代表毒株相同；本研究获得的10株PRRSV毒株GP5的137位氨基酸均为S。这说明本研究获得的贺州市10株PRRSV毒株均来自于野毒株,而不是来自于疫苗株。贺州市高致病性猪繁殖与呼吸综合征的流行病学调查结果表明贺州市PRRSV的流行既存在PRRSV变异毒株又同时有经典株,结合当地养猪特点、养猪习惯、饲养水平及该地区疫情动态,采取科普宣传、疫情监测、免疫接种、全方位推进生物安全体系等综合性防控措施,取得了较好稳定防控效果。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一部分 前言
• 一、病原学
• 1.1 PRRSV的基本特征
• 1.2 病毒的理化特性
• 1.3 PRRSV的培养特性
• 二、PRRSV基因结构和编码的相关蛋白
• 2.1 PRRSV基因组的结构与特点
• 2.2 主要结构蛋白
• 2.3 次要结构蛋白
• 2.4 非结蛋白
• 三、PRRS的流行病学研究
• 3.1 传染源
• 3.2 传播途径
• 3.3 流行特点
• 3.4 流行规律
• 四、PRRS的临床症状与病理变化
• 五、猪繁殖与呼吸综合征病毒致病机制
• 六、诊断技术研究
• 6.1 抗原检测
• 6.2 抗体检测
• 七、免疫学研究
• 7.1 体液免疫
• 7.2 细胞免疫
• 八、防制策略与疫苗免疫
• 8.1 防制策略
• 8.2 疫苗免疫
• 8.2.1 灭活疫苗
• 8.2.2 弱毒疫苗
• 8.2.3 亚单位疫苗
• 8.2.4 核酸疫苗
• 8.2.5 活载体疫苗
• 九、研究的目的和意义
• 第二部分 试验研究
• 一、贺州市猪繁殖与呼吸综合征流行病学调查
• 1. 材料
• 1.1 临床样本的来源
• 1.2 主要试剂
• 1.3 试剂的配制
• 1.4 主要仪器
• 2 方法
• 2.1 引物
• 2.2 猪圆环病毒（PCV-2）的检测
• 2.3 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪瘟病毒（CSFV）、猪流感病毒（SIV）的检测
• 3. 结果
• 3.1 贺州市猪繁殖与呼吸综合征流行情况
• 4. 讨论
• 5. 结论
• 二、贺州市PRRSV变异株分子流行病学调查研究
• 1 实验材料
• 1.1 病料的采集
• 1.2 菌种和质粒
• 1.3 主要试剂
• 1.4 主要仪器
• 2 实验方法
• 2.1 引物设计
• 2.2 病毒RNA的提取
• 2.3 RT-PCR
• 2.4 PCR产物DNA凝胶回收
• 2.5 将回收的PCR产物与pMD18-T载体连接
• 2.6 感受态细胞的制备
• 2.7 转化
• 2.8 挑斑
• 2.9 菌液PCR
• 2.10 抽提质粒
• 2.11 酶切鉴定
• 2.12 菌液测序
• 2.13 序列分析
• 3 结果与分析
• 3.1 Nsp2的基因克隆及序列分析
• 3.2 ORF5基因的克隆与序列分析
• 4 讨论
• 5 结论
• 第三章 贺州市猪繁殖与呼吸综合征防控措施
• 1 猪繁殖与呼吸综合征防控的主要关键措施
• 1.1 免疫预防接种是预防猪繁殖与呼吸综合征的重要措施
• 1.2 防控高致病性猪繁殖与呼吸综合征的综合措施
• 2 贺州市防控猪繁殖与呼吸综合征的主要做法
• 2.1 政府高度重视,是防控猪繁殖与呼吸综合征的保证
• 2.2 建立标准化的生猪无公害养殖生产基地,有效防控猪繁殖与呼吸综合征
• 2.3 强化疫苗免疫工作,有效控制猪繁殖与呼吸综合征的发生
• 2.4 指导养猪场（户）采取切实可行的综合防控措施
• 3 贺州市猪繁殖与呼吸综合征的防控效果
• 3.1 降低了猪繁殖与呼吸综合征的发病率和死亡率
• 3.2 促进了该市养殖业的健康发展
• 3.3 改变了生猪的饲养模式
• 4 讨论
• 全文结论
• 参考文献
• 英文缩写对照表
• 致谢
• 硕士期间发表的文章情况