论文摘要
目的：本研究论文的目的是分离鉴定两面针提取物中具有显著调节STAT3信号通路的活性成分,评价STAT3信号通路小分子抑制剂的体内外抗肿瘤和抗炎症等药理活性。方法：①利用HepG2/STAT3报告基因测试筛选提取物和化学组分；②基于活性导向法,综合利用silica gel, sephadex LH-20, PTLC和HPLC等色谱分离两面针提取物中的化学成分；③综合利用NMR和MS等波谱学数据鉴定和表征化合物分子结构；④评价化合物对不同肿瘤细胞信号通路选择性；⑤利用细胞分子生物学技术评价和探讨抑制剂体外对肿瘤（干）细胞增殖,凋亡和迁移活性,并利用人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤模型进一步评价体内抗肿瘤效果；⑥利用小鼠烫伤炎症模型,评价抑制剂对小鼠烫伤皮肤伤口愈合的药效。结果：①利用HepG2/STAT3报告基因测试表明两面针根乙酸乙酯和甲醇提取物表现出显著活性;②基于活性测试为导向从两面针乙酸乙酯和甲醇提取物中分离获得12个化合物,鉴定11个化合物,分别为：8-methoxy-dihydrochelerythrine （YS12806）,8-methoxy-9-demethoxyldihydrochlerythrine （MH24701）,oxychelerythrine （MH23711）, avicine （MH24506）, nitidine （MH24218）, liriodenine （MH24404）, isobutyl benzoate （MH32501）,L-sesamin （YS13805）, skimmianine （YS13206）, β-stigmasterol （YS13806）和4-hydroxy-N-methylproline （YS12903）;③实验证实8-methoxy-dihydrochelerythrine为药理活性较强的选择性STAT3信号通路抑制剂（IC50=7.1μM）;④YS12806显著抑制多种人肿瘤（干）细胞增殖（IC50=0.22-8.0μM）并诱导其凋亡,抑制肿瘤细胞迁移和侵袭,抑制JAK2和STAT3的磷酸化水平,下调JAK2/STAT3信号通路下游功能蛋白如Cyclin B1、Survivin. ICAM-1、VEGF的表达水平；⑤YS12806在20mg/Kg剂量时能显著抑制人肝癌细胞裸鼠皮下移植瘤的成长；⑥YS12806显著促进烧烫伤性伤口愈合。结论：本实验论文基于活性导向法从两面针提取物中分离鉴定11个化合物结构,avicine, isobutyl benzoate和4-hydroxy-N-methylproline为首次从该植物中分离获得；实验证实先导化合物8-methoxy-dihydrochelerythrine （YS12806）是药理活性较强的选择性STAT3信号通路小分子抑制剂,为特异性分子靶向抗癌药物研发奠定了科学基础。
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摘要Abstract目录第一章 前言一、STAT3信号通路和STAT3分子结构二、STAT3信号通路的病理生理学功能（一） STAT3与炎症（二） STAT3与肿瘤的发生,血管生成和转移（三） STAT3与免疫系统三、STAT3信号通路小分子抑制剂的作用机制（一） 间接作用（二） 直接作用四、天然和合成的STAT3信号通路小分子抑制剂研究进展五、基于HepG2/STAT3报告基因测试药用植物提取物初步筛选结果六、花椒属植物两面针植物分类与命名（一） 两面针植物分类（二） 两面针命名七、花椒属植物两面针植物性状描述八、花椒属植物两面针地理分布九、花椒属植物两面针传统药用价值十、两面针的现代药理和化学研究现状（一） 花椒属植物两面针现代药理研究（二） 花椒属植物两面针化学成分研究十一、课题立项依据,研究意义和研究目标（一） 立项依据与研究意义（二） 研究目标第二章 基于药理活性导向法筛选分离两面针STAT3调节剂第一节 实验材料一、药材采集和准备二、试剂与色谱填料三、仪器第二节 实验方法一、两面针根提取物的预制备二、HepG2/STAT3报告基因筛选测试三、液相分离两面针根MeOH提取物获得其化学微组分四、两面针根提取物的放大制备五、活性微化学组分MH20709中化学成分追踪分离与纯化六、活性微化学组分MH20704中化学成分追踪分离与纯化七、两面针根的活性化学成分的放大分离与纯化八、两面针STAT3信号通路抑制剂YS12806的放大制备九、化合物的纯度检测第三节 实验结果一、两面针根提取物HepG2/STAT3报告基因活性筛选二、化学微组分MH20701-10的HepG2/STAT3报告基因活性筛选三、活性化学成分追踪分离与纯化四、化合物的纯度检测第四节 小结与讨论第三章 分离化合物的结构鉴定和表征第一节 实验材料一、试剂二、仪器第二节 化合物的结构表征一、化合物YS12806结构鉴定二、化合物MH24701结构鉴定三、化合物MH23711结构鉴定四、化合物MH24506结构鉴定五、化合物MH24218结构鉴定六、化合物YS12904结构鉴定七、化合物YS13206结构鉴定八、化合物MH32501结构鉴定九、化合物YS13805结构鉴定十、化合物YS13806结构鉴定十一、化合物YS12903结构鉴定第三节 小结与讨论第四章 化合物对不同肿瘤细胞及其信号通路选择性活性评价第一节 实验材料一、细胞二、试剂三、仪器第二节 实验方法一、细胞培养二、信号通路调节剂的体外筛选方法三、两面针分离化合物对肿瘤细胞增殖活性评价四、Western Blot检测五、数据处理第三节 实验结果一、两面针分离化合物对三种肿瘤细胞信号通路的活性评价二、两面针分离化合物对多种人来源肿瘤细胞增殖活性评价三、两面针分离化合物对IL-6诱导肿瘤细胞STAT3磷酸化表达的影响第四节 小结与讨论第五章 STAT3信号通路抑制剂对人肝癌细胞体内外活性评价第一节 实验材料一、细胞株二、实验动物三、试剂四、仪器第二节 实验方法一、Huh-7细胞的培养二、STAT3信号通路抑制剂对人肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡活性评价三、STAT3信号通路抑制剂对人肝癌干细胞增殖活性评价四、STAT3信号通路抑制剂对人肝癌Huh-7细胞迁移和侵袭活性评价五、WesternBlot检测STAT3信号通路抑制剂对人肝癌Huh-7细胞增殖,凋亡和迁移相关功能蛋白表达水平六、STAT3信号通路抑制剂YS12806对人肝癌Huh-7细胞裸鼠移植瘤药效评价七、数据处理第三节 实验结果一、STAT3信号通路抑制剂对人肝癌Huh-7细胞增殖和凋亡活性评价实验结果二、STAT3信号通路抑制剂对人肝癌干细胞增殖活性评价三、STAT3信号通路抑制剂对人肝癌Huh-7细胞迁移和侵袭活性评价四、WesternBlot检测STAT3信号通路抑制剂对人肝癌Huh-7细胞增殖,凋亡和迁移相关功能蛋白表达水平五、STAT3信号通路抑制剂YS12806对人肝癌Huh-7细胞裸鼠移植瘤药效评价第四节 小结与讨论第六章 STAT3信号通路抑制剂对小鼠烫伤皮肤伤口愈合效果评价第一节 实验材料一、实验动物二、试剂三、仪器第二节 实验方法一、小鼠烫伤模型的制备二、小鼠烫伤皮肤组织生化指标的检测三、小鼠烫伤皮肤组织石蜡切片HE（Hematoxylin-eosin staining）染色四、增殖细胞核抗原（PCNA,Proliferating Cell Nuclear Antigen）免疫组织化学实验五、数据处理第三节 实验结果一、小鼠体重变化二、小鼠创面愈合面积三、小鼠烫伤皮肤组织生化指标的检测结果四、小鼠烫伤皮肤组织石蜡切片HE染色五、增殖细胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen,PCNA）免疫组织化学实验第四节 小结与讨论结语一、总结论二、展望参考文献附录在校期间发表论文致谢
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标签：两面针论文; 信号通路论文; 抑制剂论文; 甲氧基二氢白屈菜红碱论文; 分子靶向抗肿瘤药物论文;
源于两面针的STAT3信号通路小分子抑制剂 ——筛选分离，结构鉴定和药理活性评价
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