ADM在延髓头端腹外侧区对应激性高血压大鼠心血管活动的调节作用

论文题目: ADM在延髓头端腹外侧区对应激性高血压大鼠心血管活动的调节作用

论文类型: 博士论文

论文专业: 生理学

作者: 李霞

导师: 朱大年,沈霖霖,李莉,曹银祥

关键词: 延髓,延髓头端腹外侧区,中脑导水管灰质背侧部,肾上腺髓质素,受体,血压,心率,一氧化氮,神经源性一氧化氮合酶,诱导型一氧化氮合酶,单细胞外放电记录

文献来源: 复旦大学

发表年度: 2005

论文摘要: 目的:通过观察应激致高血压过程中肾上腺髓质素(ADM)及其受体在延髓(尤其是延髓头端腹外侧区)的动态变化以及微量注射或微电泳ADM至延髓头端腹外侧区(rVLM)对大鼠收缩压(SBP)、心率(HR)和神经元细胞外放电频率的影响,初步探讨ADM在应激性高血压发生发展中的作用,为了解ADM对心血管活动的中枢调节作用以及在应激致高血压这一病理过程中可能的病理生理意义提供实验依据。 方法:以足底电击结合噪声建立条件反射为基本应激手段,连续应激15天制备应激性高血压大鼠模型;采用逆转录—聚合酶链式反应(RT-PCR)、放射免疫测定(RIA)、原位杂交(ISH)和免疫组织化学(IHC)等方法,观察应激致高血压过程中大鼠延髓ppADM及其特异性受体组件—降钙素受体样受体(CRLR)、受体活性修饰蛋白2和3(RAMP2和RAMP3)的表达以及ADM含量变化;应用中枢核团微量注射、中脑导水管周围灰质背侧(dPAG)电刺激以及细胞外放电记录的方法,观察大鼠肾上腺髓质素(rADM)在rVLM的作用及可能机制。 结果:(1) 大鼠连续应激15天后股动脉收缩压(SBP)逐渐上升,应激第15天达到高峰,SBP为148.34±7.84mmHg,与对照组血压(114.89±6.38mmHg)相比两者差异具有显著统计学差异(P<0.01)。同时,应激5天内大鼠HR显著加快,由378±9.78b/min增加到442±12.34b/min(P<0.01),应激10、15天虽然HR加快较前有所减慢,但较对照组仍明显加快(P<0.01)。说明应激性高血压模型制备成功;(2) RT-PCR和RIA结果表明:与对照组相比,除应激第1天外,应激组动物ppADM的基因表达均明显下调(P<0.05或P<0.01);ADM含量在应激第15天显著升高(P<0.01),而在其它时间点变化幅度无明显差异;ADM特异性受体组件—CRLR和RAMP2基因表达在应激第5天均明显下调,而在应激第15天明显上调(P<0.05);RAMP3基因表达在应激过程中虽有下调趋势,但与对照组比较无统计学差异;(3) ISH和IHC形态学结果显示,在闩前1.0～3.0mm之间的延髓组织中ppADM mRNA杂交信号和免疫阳性细胞在rVLM、面神经核分布最多,中缝核、巨细胞背核、舌下神经核和下橄榄核等处尚有中等量阳性细胞,而孤束核较少。在应激第5天,rVLM区ppADM mRNA表达和ADM免疫阳性细胞较对照组明显增加(P<0.01),但在应激第1、10、15天无显著变化(P>0.05);(4) 单侧rVLM微量注射0.001pmol、0.01pmol或0.1pmol rADM可引起正常大鼠出现剂量依赖性SBP升高和HR加快效应,其中0.01pmol和0.1pmol rADM对心血管活动的影响维持约40min到1h;在应激性高血压大鼠,采用单侧

论文目录:

英文缩略词表

中文摘要

英文摘要

前言

材料和方法

1.材料

1.1 实验动物及一般处理

1.2 主要仪器和设备

1.3 主要试剂

1.4 ADM重组质粒DNA制备常用试剂配制及处理

1.5 原位杂交常用试剂配制及处理

2.方法

2.1 大鼠延髓组织取材及标本处理

2.2 应激性高血压大鼠模型制备

2.3 原位杂交方法检测延髓ppADM mRNA的表达

2.4 免疫组织化学方法检测延髓ADM免疫阳性细胞变化

2.5 RT-PCR法检测延髓组织中ppADM、CRLR、RAMP2和RAMP3 mRNA表达

2.6 放射免疫法测定延髓ADM浓度

2.7 中枢核团rVLM微量注射

2.8 中脑导水管周围灰质背侧电刺激

2.9 rVLM神经元自发放电细胞外记录及微电泳

3.实验数据统计学处理

结果

1.应激性高血压大鼠模型制备

1.1 应激大鼠行为和生长方面的改变

1.2 持续足底电击结合噪声应激引起的SBP、HR动态变化

2.应激致高血压过程中延髓ppADM及其特异性受体表达动态变化

2.1 PCR扩增产物测序鉴定

2.2 GAPDH和目的基因共管PCR最佳循环数确定

2.3 延髓ppADM及其特异性受体mRAN表达的动态变化

3.应激致高血压过程中延髓ADM水平动态变化

4.应激致高血压过程中ADM阳性细胞分布变化

4.1 重组表达质粒pcDNA3.0-rADM鉴定

4.2 RNA探针合成及检测

4.3 延髓ppADM mRNA表达和ADM免疫阳性细胞分布变化

5.rVLM微量注射rADM对正常大鼠SBP、HR的影响

6.rVLM微量注射rADM及其受体拮抗剂对防御性心血管反应的影响

7.rVLM微量注射rADM、受体拮抗等对应激性高血压大鼠SBP、HR率的影响

8.微电泳rADM、hADM(22-52)等对应激性高血压大鼠rVLM区压力敏感心血管相关神经元自发放电频率的影响

8.1 压力敏感心血管相关神经元鉴定

8.2 rVLM神经元自发放电形式

8.3 rADM、hADM(22-52)等对rVLM心血管相关神经元自发放电频率的影响

讨论

1.应激性高血压模型改进和效果评估

2.应激致高血压过程中延髓ADM及其特异性受体变化及其可能意义

3.rADM在rVLM对大鼠心血管活动的中枢调节作用

4.rADM对应激性高血压大鼠心血管活动的中枢调节作用机制探讨

4.1 ADM特异性受体

4.2 nNOS-NO途径

4.3 直接兴奋rVLM压力敏感心血管神经元，增强交感神经活动

结论

参考文献

致谢

文献综述

论文独创性声明

论文使用授权声明

发布时间: 2005-09-19

参考文献

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