论文摘要
目的：构建端粒酶催化亚单位启动子／胸腺嘧啶脱氧核苷激酶（hTERTp／TK）肿瘤特异性表达系统，并探讨其靶向性杀伤鼻咽癌细胞的效应。方法：克隆hTERT启动子及TK基因，酶切后连接到pGL3载体上，构建hTERTp／pGL3，TK／pGL3，hTERTp／TK／pGL3重组载体。用CMV作为实验阳性对照，并应用类似方法构建CMV／TK／pGL3重组质粒；通过RT-PCR方法，用脂质体分别将hTERTp／pGL3，TK／pGL3，hTERTp／TK／pGL3及CMV／TK／pGL3瞬时转染至鼻咽癌HNE1细胞和正常成纤维细胞，24h后加入GCV，观察细胞的形态，检测鼻咽癌细胞的凋亡。48h后收获细胞，检测转染细胞中端粒酶及其亚单位hTERTp和TK基因的表达，并采用MTT法进行比较以检测其每组细胞活性。结果：采用双酶切鉴定hTERTp／pGL3、TK／pGL3、hTERTp／TK／pGL3及CMV／TK／pGL3重组质粒，均显示构建成功。荧光素酶活性检测实验显示CMV／pGL3活性强于hTERTp／pGL3，瞬时转染鼻咽癌HNE1细胞显示hTERTp／TK／pGL3杀伤鼻咽癌HNE1细胞效果明显高于hTERTp／pGL3、TK／pGL3对照组，但是低于CMV／TK／pGL3阳性对照组。转染hTERTp／TK／pGL3及CMV／TK／pGL3至鼻咽癌HNE1细胞后TK基因的表达较hTERTp／pGL3、TK／pGL3对照组明显升高，端粒酶及其亚单位hTERTp的表达均较CMV／TK／pGL3阳性对照组降低。结论：hTERTp调控TK基因特异表达系统具有靶向性杀伤鼻咽癌细胞作用。