几种舌苔蛋白组学初步研究

论文摘要

目的:舌诊是指导中医辨证论治的重要诊断依据,舌苔是临床察舌的主要内容。舌苔原理及其客观化研究是中医现代化基础研究中的一个重大关键性课题,伴随人类基因组计划的完成,人类对生命本质与疾病的研究进人了后基因组时代。功能基因组和蛋白质组学是现代生命科学的最重要的前沿领域。本研究在多年研究成果的基础上,运用蛋白质组学技术,基于分子整体水平开展舌苔原理的微观辨证学研究,探讨舌苔蛋白质组及中医证候之间的相互关系,探索舌苔与证候的分子生物学事件。方法:将观察对象根据有无各系统器质性疾病及舌苔表现,分为正常薄白苔、病理薄苔、厚苔、剥苔组,每例用刮勺用力刮取舌苔后离心、洗涤。以固相pH梯度等电聚焦为第一向、垂直SDS-PAGE为第二向的双向电泳技术中的关键因素与环节,如样品处理、上样量、电泳参数、凝胶浓度和SDS凝胶电泳染色方法等进行了研究和实验条件的优化。并对其四组舌苔组织的蛋白质组进行分离,银染显色,凝胶扫描入计算机,ImageMaster 2DPlatinum软件分析比较电泳图谱;选择36个差异点切下,胶内胰酶消化后,进行质谱（MALDL-TOF-MS）ImageMaster 2D Platinum软件分析获得的二维凝胶图像。结果:建立并优化了舌苔蛋白质组双向电泳技术,建立了舌苔蛋白质组研究图像分析体系,获得了分辨率和重复性均较好的舌苔蛋白质组双向电泳银染图谱。在此基础上对四组舌苔组织的蛋白质组进行分离分析,结果发现凝胶中可检测的蛋白质斑点数分别为1082±105个、1052±85个、1129±98个、1143±140个。筛选出具有明显表达差异的36个斑点,对其36个差异蛋白质点进行了肽质指纹的质谱分析鉴定,软件对比分析确立了36种明显差异表达的蛋白质点,并初步确定了其等电点和分子量。对其中3个差异蛋白质点进行了肽质指纹的质谱分析鉴定,查询NCBI蛋白质数据库,初步鉴定了该3个蛋白质分别为cytokeratin 13、GAL7 protein和cystatin B。所鉴定出的蛋白质有可能与与病理舌苔的发生、发展有关,也可能成为潜在的标志物。结论:舌苔蛋白质组学研究方法学上是可行的;不同病理舌苔与正常舌苔的蛋白质表达谱存在明显差异;舌苔蛋白质组学深入研究可望为中医临床辨证、中医疗效评价、中药药效学研究及中药新药筛选研究提供具有中医特色的微观指标和科学依据。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 中英对照缩略词
• 前言
• 技术路线
• 上篇 理论研究
• 1 蛋白组学的概念和发展现状
• 2 蛋白质组研究技术的发展现状
• 3 蛋白质组学在中医药研究中的应用
• 4 舌诊源流、传统认识及其临床意义
• 5 舌苔原理现代研究现状
• 下篇 实验研究
• 实验一 舌苔蛋白质双向电泳技术的建立
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 实验二 几种常见舌苔组织蛋白质组差异表达的双向电泳分离和鉴定
• 1 材料和方法
• 2 结果
• 3 讨论
• 4 结论
• 全文小结
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢