液体深层培养猪苓菌丝体及猪苓多糖的研究

论文摘要

猪苓(Grifola umbellata)是近年来研究、开发的比较多的珍奇药食用菌之一,其多糖和多糖复合物在抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、增强免疫、降血糖、治疗糖尿病等多方面具有明显的效果。本实验通过单因素影响试验确定了发酵培养基的碳、氮源,在此研究基础上,首先运用二水平实验设计对发酵培养基的6个因素进行筛选,选取了3个重要因素进行响应面实验分析。应用SAS软件进行岭脊分析,得到了最佳培养基组成:蔗糖4%,玉米粉1.5%,豆饼粉3.65%,玉米浆粉0.61%,麸皮0.5%,KH2PO4 0.2%,MgSO4 0.24%。研究了发酵最佳培养条件为:培养基的起始pH 5.0、温度26℃、装液量100mL/250mL和接种量8%。在这些条件下培养6天,其菌体干重为47.8g/L,胞内多糖产率达3.17g/L。在猪苓基础培养基中添加一定量的中草药提取液,以猪苓的菌丝生长量和多糖产量为指标,筛选出对猪苓菌丝生长和多糖产量有促进作用的中草药:黄芪、薏苡仁、枸杞子和山药。黄芪、薏苡仁、枸杞子的合适剂量为150g/L,山药的合适剂量为50g/L。为利用猪苓深层发酵活性多糖提供了优良配方。对发酵得到的猪苓菌体胞内多糖的提取工艺条件进行了研究。采用匀浆法处理猪苓菌丝体时,其最佳提取工艺为:提取温度90℃,水料比为8:1,提取时间1.5小时,提取次数2次,加3倍体积的无水乙醇沉淀,醇沉温度4℃。在上述条件下,胞内多糖提取率为58.3mg/g。此外,对不同的提取工艺进行了比较。对猪苓多糖的性质进行了初步鉴定,研究发现其胞内的总糖含量为70.88%、单糖含量为0.98%、肽含量为17.23%。经HPGFC检测其有效成分峰的分子量为11168Da和781668Da,归一化含量为60%。胞外多糖总糖含量为62.86%、单糖含量为0.31%、肽含量为24.51%,有效成分峰的分子量为9919Da,归一化含量为63.23%。最后,对猪苓胞内多糖和胞外多糖进行了氨基酸分析,结果表明两者都含有17种氨基酸,其中必需氨基酸含量分别占氨基酸总量的20.11%和32.08%。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 真菌多糖
• 1.2 猪苓简介
• 1.3 猪苓多糖的国内外研究进展
• 1.4 药理
• 1.5 微生物发酵中药研究概况
• 1.6 本课题研究的意义
• 1.7 本课题研究的内容
• 第二章 猪苓深层培养条件的研究
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 实验材料
• 2.1.2 培养基
• 2.1.3 分析测定方法
• 2.2 结果与讨论
• 2.2.1 不同碳源对猪苓胞内多糖产率的影响
• 2.2.2 不同氮源对猪苓胞内多糖产率的影响
• 2.2.3 响应面试验分析确定最适培养基
• 2.3 摇瓶发酵条件的优化
• 2.3.1 起始pH 对猪苓液体发酵的影响
• 2.3.2 装液量对猪苓液体发酵的影响
• 2.3.3 温度对猪苓液体发酵的影响
• 2.3.4 接种量对猪苓液体发酵的影响
• 2.3.5 摇瓶发酵周期实验
• 2.4 主要结论
• 第三章 几种中药提取液对猪苓发酵的影响
• 3.1 材料和方法
• 3.2 结果与讨论
• 3.3 主要结论
• 第四章 猪苓胞内多糖的提取工艺研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料与方法
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 主要仪器
• 4.2.3 实验方法
• 4.3 结果与讨论
• 4.3.1 猪苓菌丝体胞内多糖提取工艺的优化
• 4.4 主要结论
• 第五章 猪苓多糖性质的初步鉴定
• 5.1 引言
• 5.2 材料与方法
• 5.2.1 供试材料
• 5.2.2 主要试剂
• 5.2.3 主要仪器设备
• 5.2.4 实验方法
• 5.3 结果与分析
• 5.3.1 多糖的理化性质
• 5.3.2 多糖分子量
• 5.3.3 氨基酸组分分析
• 5.4 主要结论
• 第六章 结论
• 致谢
• 参考文献
• 作者在攻读硕士学位期间发表的论文