低频脉冲电磁场对大鼠骨髓来源的内皮祖细胞的影响

论文摘要

实验背景及目的缺血性心脏病是危害人类健康的重要疾病,促进内皮修复,血管形成是治疗这一疾病的主要措施。国内外研究发现内皮祖细胞不仅参与血管形成,也参与出生后血管生成和内皮细胞损伤后的修复,并且骨髓来源内皮祖细胞参与的血管形成占全部新生血管的5%-25%。研究发现EPCs的数量、功能等生物学特性与心血管疾病的危险因素如高脂血症、糖尿病、C-反应蛋白（C-reactive protein,CRP）等成负相关,这种情况下其血管形成能力下降。对此,人们提出了治疗性血管形成策略。磁场作为一种外来干预手段,已发现其可促进内皮细胞修复,促进内皮细胞成纤维细胞生长因子（Fibroblast growth factor FGF）的分泌,并且在纤维蛋白包被的环境中形成三维血管结构,提示磁场对血管形成具有促进作用。所以本实验目的是通过研究低频电磁场对内皮祖细胞的影响,观察不同的磁场强度和作用时间对EPC的生物学效应的影响,为治疗性血管形成提供新的理论基础。实验方法第一部分骨髓内皮祖细胞的原代培养,纯化及鉴定无菌分离大鼠股骨及胫骨,用不完全培养液冲洗骨髓腔,收集细胞悬液,利用Ficoll密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞（mononuclear cells,MNCs）,接种在含有血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（basic fibroblast growth factor,bFGF）的培养基中进行培养。取培养4天的细胞,利用激光共聚焦进行细胞鉴定,细胞FITC-UEA-I和Dil-acLDL双染色阳性为正在分化的内皮祖细胞。第二部分低频脉冲电磁场对内皮祖细胞增殖能力、NO分泌和凋亡的影响取培养4天的细胞,采用不同磁场强度和作用时间的低频脉冲电磁场作用于内皮祖细胞,细胞干预3天后,MTT检测EPC的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期和凋亡,硝酸酶还原法检测NO分泌水平。统计学分析:数值均以x±s表示。数据采用SPSS11.0统计软件包进行统计分析,应用单因素方差分析进行统计学分析,有统计学意义的采用LSD-t检验进一步比较。实验结果1.体外成功培养出大鼠骨髓来源的内皮祖细胞,并经鉴定证实。2.与对照组相比,0.6mT（4h、8h）和1.0mT（2h）可促进内皮祖细胞的增殖（P<0.01）,1.0mT（4h, 8h）细胞增殖活性与对照组相比明显下降（P<0.01）。3.与对照组相比,0.6mT（8h）和1.0mT（2h）可促进内皮祖细胞的NO分泌（P<0.01）,1.0mT（2h）组与0.6mT（8h）组相比无统计学差异;1.0mT（8h）细胞NO分泌与对照组相比下降（P<0.01）。4.与对照组相比, 1.0mT（8h）可促进内皮祖细胞的凋亡（P<0.01）,其余各组与对照组相比差别无统计学意义（P>0.05）。结论低频脉冲电磁场可影响BM-EPCs的生物学特性,具有强度和时间依赖性,适当强度和作用时间可促进细胞增殖、使NO分泌量增加、而对细胞凋亡并无影响;当磁场作用强度和时间增加,可抑制细胞增殖活性,促进细胞凋亡,并可减少NO分泌。

论文目录

• 缩略语表
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 文献回顾
• 正文
• 实验一 大鼠骨髓来源的内皮祖细胞的原代培养，纯化及鉴定
• 1 材料
• 2 方法
• 3 结果
• 4 讨论
• 实验二 低频脉冲电磁场对大鼠骨髓来源的内皮祖细胞增殖活性、NO 分泌和凋亡的影响
• 1 目的
• 2 材料
• 3 方法
• 4 数据分析
• 5 结果
• 6 讨论
• 小结
• 参考文献
• 个人简历和研究成果
• 致谢