柴胡桂枝汤对大鼠乙酸胃溃疡愈合过程中bFGF表达的影响及意义

论文摘要

目的 动态观察大鼠乙酸胃溃疡愈合过程中肉芽组织内bFGF的表达以及药物对bFGF的影响,进一步阐明柴胡桂枝汤的作用机制。 方法1.建立大鼠乙酸胃溃疡模型。健康雌性SD大鼠116只,体重220-250g,由中国医学科学院实验动物中心提供。动物购回后饲养5天（以标准饲料喂养,自由饮水）,取108只大鼠,禁食不禁水12h造模,用20%乌拉坦1.1—1.2ml/200—250g腹腔注射麻醉大鼠。消毒后,在剑突下腹正中切口依次切开腹壁,暴露腹腔,将胃轻轻拉出,于胃前壁体窦交界处血管最少的区域,用微量注射器向浆膜下注射20%乙酸50μl,隆起透明皮丘近1cm左右,乙酸基本无渗漏,然后用大网膜包裹后关闭腹腔。术后5d所有大鼠均在注射局部产生一个界限清楚,深达肌层的溃疡,约为5-7mm大小。实验将术后第5d定为溃疡发生的第1d并开始灌药。 将造模后的动物随机分为:柴胡桂枝汤组:36只,按4.8g·kg-1·d-1（以体表面积换算的原方剂量）给予柴胡桂枝汤灌胃。Cimetidine组:36只,按68g·kg-1·d-1给予Cimetidine灌胃。模型对照组（Model）:36只,每只给予同等容量的生理盐水灌胃。另取8只大鼠,设为正常对照组（Normal）,正常饲养,不做任何处理,5天后处死。前3组大鼠术后正常饮食,并随机各自分成5d、30d、126d共3个时间段,分别灌胃5d、30d、30d-126d停药;并在相应时间段处死等量大鼠。以溃疡或疤痕平行于胃长轴方向的最长径为中心取材（包含溃疡及溃疡边缘的正常黏膜;Nomal组在相同部位取材）:沿最长径将标本一分为二,铺平在滤纸上后,分别用4%多聚甲醛液,固定24h,再将溃疡面垂直于切面进行石蜡包埋,以最长径为中心4μm作连续切片。4%多聚甲醛固定的每个标本切片3套,间隔8片,每套4份,第一份作HE常规染色,第2,3,4份用APES处理的防脱片玻片涝片后,放进60℃烤箱40秒,再放入4℃冰箱备用。取每只大鼠3套切片的第4份共3张,每组（随机）6只,共18张作bFGF免疫组织化学染色。观察溃疡形成后的5d,30d,126d肉芽组织中bFGF表达以及药物对它的影响。 参照文献用Weibal体视学方法进行定量分析。每只大鼠3张切片,每组测湖北中医学院2005届硕士毕业论文1S张。以测试勃膜为参照系,参照蔡文琴方法进行,在400倍镜下,计数与任一测点外上角横线上缘与竖线右缘交叉的阳性细胞数,连续计数5个视野bFGF阳性细胞数。按下列公式计算bFGF的面数密度N,:N^=Nx,/a·Pr。:Nx,为bFGF阳性细胞的总落点数;Pr.为测试勃膜总落点数;a为一个测试点对应的面积,按上述公式求出每鼠肉芽组织bFGF阳性细胞的N^,取每组鼠的均值参加各组统计。最终数据以又士S表示,用方差分析的F检验和两两比较的q检验进行统计学处理。 结果①bFGF阳性细胞呈现棕色或棕黄色。bFGF主要表达于嗜酸性粒细胞,罕见表达于成纤维细胞、微血管内皮细胞②在乙酸大鼠胃溃疡愈合的不同阶段,bFGF表达具有差异。溃疡形成后的第5d,各组肉芽组织bFGF表达增加,与正常对照组相比和模型组相比,CHGZT组表达增加差异具有统计学意义（P<O.05）;与模型组相比,Cimetidine组增加差异不具有统计学意义（p>0 .05）。溃疡形成后的第3Od,各组肉芽组织bFGF表达下降。与同组第5d相比,模型组下降差异具有统计学意义（p<0 .05）;与模型组相比,CHGZT组下降差异具有统计学意义 （p<0.05）,Cimetidine组下降差异不具有统计学意义（p>0.05）。溃疡形成后的第126d,模型组和Cimetidine组bFGF表达增加,与同组30d相比,模型组增加差异不具有统计学意义（p>0 .05）,与模型组相比,Cimetidine组增加差异不具有统计学意义（p>0 .05）;而CHGZT组bFGF表达仍呈下降趋势,与模型组相比,下降差异具有统计学意义（p<0 .05）。 结论抑制嗜酸性粒细胞浸润,调节疤痕肉芽组织bFGF表达,是柴胡桂枝汤延迟大鼠乙酸胃溃疡复发的机制之一。 关键词柴胡桂枝汤bFGF嗜酸性粒细胞溃疡愈合质量

论文目录

• 一.中文摘要
• 二.英文摘要
• 三.前言
• 四.实验研究
• 材料方法
• 结果（附图片）
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 五.综述
• 六.致谢