n-3高不饱和脂肪酸对黑鲷幼鱼生长及脂肪代谢的影响

论文摘要

本文研究了饲料中添加n-3高不饱和脂肪酸对黑鲷幼鱼生长、体组成及血浆生化指标的影响,并由此得出黑鲷幼鱼达到最佳增重时对饲料中n-3HUFA%及DHA/EPA的需要量,进而通过研究组织中主要生酯酶（FAS）及主要脂解酶（HSL）的活性及基因表达来初步探讨饲料n-3]HUFA调控黑鲷脂肪代谢的主要机理。研究内容包括：（1）饲料中添加不同水平n-3HUFA对黑鲷幼鱼生长及体组成的影响；（2）饲料中DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼生长及体组成的影响；（3）黑鲷FAS及HSL基因克隆及序列分析；（4）饲料n-3HUFA含量及DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼脂肪代谢相关酶活性及基因表达的影响。（1）选取平均体重为（8.08±0.09）g、健康、体质均匀的黑鲷幼鱼360尾,随机放养入18个水泥池中搭建的网箱中。通过用鱼油和玉米油调和脂肪酸含量,将试验饲料配制成n-3HUFA含量分别为0.79,0.83,0.85,0.88,0.92,0.94%,DHA/EPA比值固定（2.8／1）的试验饲料,随机分配给六组,每组三个重复。每天投饵时间为8：00和16：00,以眼观饱食（投饵率3-5%）为准,试验条件同上。八周饲养试验结束后,对黑鲷幼鱼生长性能、饲料效率,蛋白质效率等指标进行测定,并分析体组织常规成分组成及肝脏、肌肉和腹腔脂肪组织脂肪酸组成及血浆生化指标的变化。试验结果表明,黑鲷脂肪细胞直径呈减小趋势,n-3HUFA水平最高组显著小于试验组3。肌肉脂肪含量受n-3HUFA的显著影响,且在第四组时达到最低；黑鲷幼鱼全鱼组织常规营养成分含量在各组之间差异不显著。肝脏、肌肉及腹腔脂肪组织中∑SFA和16：0均随饲料n-3HUFA水平的增加呈下降趋势,∑n-3HUFA呈显著上升趋势。各组织中DHA/EPA比值不受饲料脂肪酸的影响。黑鲷幼鱼血浆甘油三酯和胆固醇含量随饲料中n-3HUFA的添加有下降趋势。以增重率为参考指标,在本试验条件下,黑鲷幼鱼[（8.08±0.09）g]获得最佳增重时对饲料中n-3 HUFA的需要量为0.87%DM,即8.7 g/kg饲料干物质。（2）选取平均体重为（11.01±0.02）g的黑鲷幼鱼420尾,在与试验一相同的条件下研究n-3HUFA含量一定,DHA/EPA比值不同（1.98,2.20,2.46,2.88,＼3.15,3.57,4.04）的试验饲料对黑鲷幼鱼生长性能、饲料效率、蛋白质效率,体组织营养组成及血浆生化指标的影响。试验结果表明,与DHA/EPA最低组相比,黑鲷幼鱼腹脂率（IPF ratio）有明显减少,并在试验组3时达到最低。脂肪细胞直径随饲料DHA/EPA比值的变化趋势不明显,但在试验组5,6时显著低于其它各组。试验结束后对试验鱼体组织营养成分进行分析。结果显示,肌肉脂肪含量在饲料DHA/EPA>2.46时有显著降低,降幅约为8.59%。全鱼组织脂肪沉积量在饲料DHA/EPA>3.15时显著减少,最大降幅可达28.3%。各处理组背肌和腹腔脂肪组织n-3HUFA含量不受饲料的影响,但DHA/EPA比值随饲料水平的增加而增加。以增重率（WGR）为参考指标,二次曲线分析（y=-9.9707x2+62.696x+10.309,R2=0.9258；x,饲料DHA/EPA比值,y,WGR）表明,本试验条件下,黑鲷幼鱼（11.01±0.02 g）获得最佳增重时饲料中DHA/EPA比值为3.15。（3）本研究克隆了黑鲷FAS和HSL基因片段,其片段长度分别为464 bp和664 bp,分别编码150和221个氨基酸。BLAST比对分析结果表明,黑鲷FAS基因片段同斑马鱼（Danio rerio）同源性为76%。黑鲷HSL基因片段同斑马鱼同源性为69%。本试验对黑鲷FAS及HSL基因片段的克隆主要为以下试验中黑鲷幼鱼FAS及HSL基因表达的荧光定量分析作准备。（4）本试验主要通过分析组织中脂肪代谢主要酶的活性及基因表达水平,探讨饲料中不同n-3HUFA及DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼脂代谢影响的机理。对酶活的测定结果显示,肝脏组织FAS活性较高,而腹腔脂肪（IPF）组织几乎不能检测到该酶,说明FAS在黑鲷幼鱼中的表达具有组织特异性,以肝脏为脂肪合成主要器官。FAS活性在试验组1-4之间无显著差异,当饲料n-3HUFA含量在0.92%以上时开始有显著下降。腹腔脂肪组织中HSL活性随饲料n-3HUFA的添加有增加趋势,当饲料n-3HUFA含量达到最高时（0.94%）,HSL活性增加到将近一倍。饲喂不同DHA/EPA比值饲料的试验鱼肝脏组织中FAS活性不受饲料1-4的影响,随着饲料DHA/EPA比值的进一步增加呈显著下降趋势。脂肪组织HSL活性随饲料DHA/EPA比值的增加有上升趋势,但当饲料DHA/EPA大于2.88时进入平台期,保持在0.79左右。荧光定量分析与酶活测定结果相似,同样表现为FAS表达水平在试验组4以后开始下降,而HSL随饲料n-3HUFA或DHA/EPA升高而上升。以上研究结果表明,饲料n-3HUFA及DHA/EPA对黑鲷幼鱼脂肪代谢影响主要是对脂肪酸合成酶（FAS）和激素敏感脂肪酶（HSL）活性及基因表达进行同步调控的结果。

论文目录

• 致谢
• 摘要
• ABSTRACT
• 主要英文缩略词
• 引言
• 第一部分 文献综述
• 第一章 海水鱼类必需脂肪酸-n-3高不饱和脂肪酸研究概况
• 1 海水鱼类必需脂肪酸种类和生理功能
• 2 n-3 HUFA对鱼类营养作用的研究进展
• 2.1 乳化油和微粒饲料中n-3 HUFA的不同结构形式
• 2.2 饲料n-3 HUFA对海水鱼生长、存活的影响
• 2.3 饲料n-3 HUFA含量对海水鱼肉质的影响
• 2.4 n-3 HUFA含量对海水鱼抗应激能力的影响
• 2.5 n-3 HUFA含量对海水鱼亲鱼繁殖性能的影响
• 2.6 饲料n-3 HUFA对海水鱼神经发育及色素沉着的影响
• 3 海水鱼n-3 HUFA需要量研究进展
• 3.1 饲料DHA/EPA比值的重要性
• 3.2 部分海水鱼对饲料n-3 HUFA最适需要量的研究
• 4 海水鱼类EFA缺乏的临床症状及病理表现
• 第二章 脂肪沉积机理及脂肪代谢酶调控的研究进展
• 1 脂肪的合成、分解与转运
• 1.1 脂肪的合成
• 1.2 脂肪的分解
• 1.3 脂肪的转运
• 2 脂肪代谢酶研究进展
• 2.1 脂肪酸合成酶（FAS）
• 2.2 激素敏感脂肪酶（HSL）
• 2.3 脂蛋白脂酶（LPL）
• 第二部分 试验研究
• 第三章 饲料n-3 HUFA对黑鲷幼鱼生长及体组成的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.3 试验数据处理
• 2 试验结果
• 2.1 饲料n-3HUFA水平对黑鲷幼鱼生长性能及饲料利用效果的影响
• 2.2 饲料n-3 HUFA水平对黑鲷幼鱼体组织常规组成的影响
• 2.3 饲料n-3 HUFA水平对黑鲷幼鱼肝脏、背肌及腹腔脂肪组织脂肪酸组成的影响
• 2.4 饲料n-3 HUFA水平对黑鲷幼鱼血浆生化指标的影响
• 3 讨论
• 3.1 饲料n-3 HUFA对生长性能的影响
• 3.2 饲料n-3 HUFA对黑鲷体脂沉积的影响
• 3.3 饲料n-3 HUFA对脂肪酸组成的影响
• 3.4 饲料n-3 HUFA对黑鲷血浆生化指标的影响
• 第四章 饲料中DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼生长及体组成的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 试验方法
• 1.3 试验数据处理
• 2 试验结果
• 2.1 饲料不同DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼生长性能及饲料利用效果的影响
• 2.2 饲料不同DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼体组织常规组成的影响
• 2.3 饲料不同DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼体组织脂肪酸组成的影响
• 2.4 饲料不同DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼血浆生化指标的影响
• 3 讨论
• 第五章 黑鲷FAS及HSL基因克隆及序列分析
• 1. 基因克隆策略
• 2. 试验材料与方法
• 2.1 试验动物
• 2.2 试验材料
• 2.3 试验方法
• 3. 结果与分析
• 3.1 黑鲷肝脏组织总RNA的提取
• 3.2 PCR扩增结果
• 3.3 菌落PCR鉴定
• 3.4 克隆所得序列及同源性比对分析
• 4. 讨论
• 第六章 饲料n-3 HUFA含量及DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼脂肪代谢相关酶活性及基因表达的影响
• 1 材料与方法
• 1.1 试验材料
• 1.2 脂肪代谢相关酶活性测定
• 1.3 脂肪酸合成酶（FAS）及激素敏感脂肪酶（HSL）基因表达的荧光定量分析
• 1.4 试验数据处理
• 2 试验结果
• 2.1 饲料n-3 HUFA含量对不同组织脂肪代谢关键酶活性的影响
• 2.2 饲料DHA/EPA比值对黑鲷幼鱼脂肪代谢相关酶活性的影响
• 2.3 FAS及HSL基因表达的荧光定量分析
• 3 讨论
• 第三部分 提示与创新点
• 参考文献
• 附录 Ⅰ
• 附录 Ⅱ