侵染大豆的病毒鉴定和部分SMV分离物CP基因的序列分析

论文摘要

可以侵染大豆的病毒有许多种类,它们在各个大豆产区的组成和分布研究较少。而大豆花叶病毒（Soybean Mosaic Virus, SMV）:病是一种危害大豆的世界性病害,严重影响大豆的产量和品质。SMV存在株系分化,近年研究表明杭州地区的sMV株系可能已经发生变异,与以往鉴定结果存在一定差异,本研究在杨清华（2009）、李凯（2010）等研究基础上采用同一套鉴别寄主体系,对采自杭州地区的病样进行株系的重新鉴定与动态监测,明确该地区的流行株系及变化趋势,以期为当地的大豆抗病育种提供技术支撑和指导；对采自安徽省和黑龙江省的病样针对12种病毒（大豆花叶病毒SMV、苜蓿花叶病毒AMV、花生矮化病毒PSV、菜豆荚斑驳病毒BPMV、菜豆黄花叶病毒BYMV、烟草环斑病毒ToRSV、黄瓜花叶病毒CMV、烟草花叶病毒TMV、西瓜花叶病毒WMV、蚕豆萎蔫病毒BBWV、南方菜豆花叶病毒SBMV、烟草坏死病毒TNV）进行血清学检测,了解这2个大豆产区的田间病毒种类和影响程度,为当地的大豆病毒病害防控和育种提供指导；对SMV外壳蛋白（CP）基因进行序列分析,探索CP基因的序列同源性与SMV分离物的来源地及致病性反应之间的关系。主要结果如下：1.将2009年采自杭州地区的41个病样进行病毒的枯斑分离,共得到15个纯化后的分离物,经血清学检测,呈SMV阳性的有12个,对其进行鉴别寄主反应鉴定和株系划分,其中分离物20-1、2-4、17-4归为SC15株系,其余均归为SC9株系,由此推测SC9和SC15为杭州地区的优势株系。2.对安徽省和黑龙江省的病样进行了血清学检测,发现两省均以SMV阳性率最高,分别达19.71%和11.68%,可见SMV是危害田间大豆的主要病害。除SMV之外、安徽省以PSV、SBMV这2种病毒比率较高、分别为14.04%、13.91%。安徽省新马桥镇采样点检测到的病毒种类最多,除了SMV以外,还有其他11种病毒,在太和检测到5个PSV阳性标样,在长丰、固镇和太和均检测到3个SBMV阳性标样；黑龙江省以AMV、TNV这2种病毒比率较高,分别为10.53%、10.16%。黑龙江省北安检测到病毒种类最多,包括SMV、AMV、PSV、ToRSV、CMV、TMV、WMV、 BBWV、TNV共9种。在北安、绥化、桦川和鸡西均检测到2个SMV阳性标样,在阿城和黑龙江农科院均检测到3个AMV阳性标样,在海林、黑龙江农科院和阿城均检测到2个TNV阳性标样；3.对来自全国的16个SMV分离物的CP基因进行测序和进化分析,探索CP基因的序列同源性与SMV分离物的来源地及致病性反应之间的关系。结果表明：来自中国的SMV分离物大都聚在了比较相近的系统发育分枝上,其CP基因序列高度相似,同时国内外存在相似的分离物；CP基因的序列相似性与毒株在鉴别寄主上的症状反应之间无直接对应关系,同时与病毒来源地之间的关系尚不明确。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 缩略词表
• 第一章 文献综述
• 1 植物病毒病及危害
• 2 植物病毒的分类
• 3 植物病毒的检测
• 3.1 生物学检测法
• 3.2 电镜技术
• 3.3 免疫学检测方法
• 3.3.1 酶联免疫吸附法（ELISA）
• 3.4 分子生物学方法
• 3.4.1 核酸杂交技术（Technique of nucleic acid hybridization）
• 3.4.2 聚合酶链式反应（Polymerase chain reaction,PCR）及相关技术
• 3.4.3 链RNA（Double-stranded RNA,dsRNA）电泳技术
• 4 植物病毒的发生与防治
• 5 大豆花叶病毒
• 5.1 大豆花叶病毒的发现
• 5.2 大豆花叶病毒的基本性质和寄主范围
• 5.3 大豆花叶病毒的症状表现及危害
• 5.4 SMV传播流行方式及影响因素
• 5.5 SMV的株系划分
• 5.6 SMV基因组结构
• 5.7 SMV基因组编码的蛋白产物及其功能
• 5.8 SMV株系的基因组及CP基因的序列同源性比较
• 6 研究的目的、内容及试验方案
• 6.1 研究目的和内容
• 6.2 试验方案
• 第二章 杭州地区大豆花叶病毒的动态监测
• 2.1 引言
• 2.2 材料和方法
• 2.2.1 试验材料
• 2.2.2 试验方法
• 2.3 结果与分析
• 2.3.1 杭州地区大豆病毒病样的繁殖、血清学检测及生物纯化
• 2.3.2 15个分离物的血清学检测
• 2.3.3 杭州SMV12个分离物在10个鉴别寄主上的症状反应
• 2.4 结论与讨论
• 2.4.1 结论
• 2.4.2 讨论
• 第三章 安徽省和黑龙江省田间大豆病毒的检测
• 3.1 引言
• 3.2 材料和方法
• 3.2.1 试验材料
• 3.2.2 试验方法
• 3.3 结果与分析
• 3.3.1 安徽省田间大豆病毒的ELISA检测
• 3.3.2 黑龙江省间大豆病毒的ELISA检测
• 3.4 结论与讨论
• 3.4.1 结论
• 3.4.2 讨论
• 第四章 部分SMV分离物CP基因的克隆和序列分析
• 4.1 引言
• 4.2 材料和方法
• 4.2.1 试验材料
• 4.2.2 试验方法
• 4.3 结果
• 4.3.1 总RNA提取
• 4.3.2 RT-PCR扩增
• 4.3.3 SMV及Potyvirus其它成员CP基因核苷酸序列系统发育分析
• 4.4 结论
• 4.5 讨论
• 参考文献
• 致谢