军团菌的细胞内药敏试验及医院供水系统存活军团菌的定量检测

论文摘要

第一部分大环内酯类和氟喹诺酮类药物对细胞内军团菌的作用目的：评估大环内酯类和氟喹诺酮类药物对巨噬细胞内嗜肺军团菌的作用。方法：采用琼脂稀释法测量大环内酯类和氟喹诺酮类药物对20株嗜肺军团菌血清1型（L. pneumophila serogroup 1, Lp-1）的最低抑菌浓度（Minimal inhibitory concentration, MIC）。加入佛波酯（Phorbol 12-myristate 13-acetate, PMA）将人类单核细胞系THP-1诱导分化成巨噬细胞样的细胞。将Lp-1与分化的THP-1细胞共培养,细胞吞噬细菌后,加入红霉素、阿奇霉素、左氧氟沙星、莫西沙星4种抗菌药物在1×MIC、4×MIC、8×MIC浓度时培养24h,平板计数法双份计数细胞内存活的军团菌数。结果以细菌抑制率表示,不同抗菌药物作用的差别采用Mann-Whitney U检验分析。结果：4种抗菌药物在1×MIC、4×MIC、8×MIC浓度时作用24h后细菌抑制率分别为：红霉素：1×MIC（50.18±27.29）%,4×MIC（79.48±20.08）%,8×MIC（91.46±8.70）%；阿奇霉素：1×MIC（66.77±26.18）%,4×MIC（91.73±8.72）%,8×MIC（97.10±3.37）%；左氧氟沙星：1×MIC（99.84±0.25）%,4×MIC（99.99±0.02）%,8×MIC（99.99±0.01）%；莫西沙星：1×MIC（99.90±0.10）%,4×MIC（99.99±0.03）%,8×MIC（99.99±0.03）%。氟喹诺酮类药物在1×MIC、4×MIC、8×MIC时对细胞内的Lp-1的抑制率显著高于大环内酯类药物（U值分别为1.0、2.0和5.0,K0.05）,左氧氟沙星和莫西沙星在上述3个浓度时对Lp-1的抑制率无明显差别（U值分别为190、183和217,P>0.05）,阿奇霉素对细胞内Lp-1的抑制率高于红霉素（U值分别为132、128和125,P<0.05）。结论：氟喹诺酮类药物的细胞内抗军团菌作用优于大环内酯类药物,左氧氟沙星和莫西沙星的细胞内抗军团菌作用无显著差别,阿奇霉素的胞内抗军团菌作用优于红霉素。第二部分采用EMA-qPCR方法定量检测医院供水系统存活的军团菌目的：采用EMA （Ethidium monoazide）和Real time PCR（qPCR）结合的方法（EMA-qPCR）研究上海市医院供水系统存活军团菌的污染情况,并与qPCR和培养的结果进行比较。方法：应用不同浓度的EMA与qPCR结合定量加热处理和不加热处理的军团菌,同时采用Baclight Live/Dead细菌存活试剂盒分析作为标准,确定EMA-qPCR的最佳EMA浓度。分别采用EMA-qPCR、qPCR和培养法定量检测热处理（70℃,1h）和含氯消毒剂（自由氯浓度为10mg/L,1h）处理后的军团菌的数量。随后采用上述三种方法对上海市2家医院50个病房供水系统中的军团菌进行定量检测。结果：EMA-qPCR的最佳EMA浓度为2.5ug/mL。采用EMA-qPCR、qPCR、培养法检测消毒处理后军团菌的数量（Log（Lp-1/mL））分别为：热处理4.0、7.87、0；氯处理3.8、7.61、1.34。EMA-qPCR检测医院供水系统水样中军团菌阳性的标本数为48份,其中浓度≥103GU/L的水样为40份（80.0%）,浓度≥104Gu/L的水样为7份（14.0%）,浓度≥105GU/L的水样为1份（2.0%）。采用EMA-qPCR、qPCR和培养三种方法测定军团菌属的数量分别为（7.75±22.4）×103GU/L,（2.37±6.71）x104GU/L,（3.80±25.50）x102CFU/L；嗜肺军团菌的数量分别为（8.40±2.47）×102GU/L,（1.11±2.65）×103Gu/L,（2.15±43.87）x102CFU/L。结论：EMA-qPCR可以更快速、准确地评估消毒效果。医院供水系统中存活军团菌的浓度较高,且相当大一部分军团菌处于“活着但不能被培养”的状态,需要有效的消毒方法去除军团菌污染。

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 英文缩略语
• 第一部分 大环内酯类和氟喹诺酮类药物对细胞内嗜肺军团菌的作用
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 第二部分 采用EMA-QPCR定量检测医院供水系统存活的军团菌
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 综述（一） 军团菌病的实验室诊断方法
• 参考文献
• 综述（二） 侵袭性曲霉病非培养法的诊断进展
• 参考文献
• 致谢
• 研究生期间发表的论文
• 研究生期间参加的学术会议