论文摘要
真核细胞表面普遍存在着糖基化修饰,主要包括连接在天冬酰胺上的N-糖链,连接在丝氨酸和苏氨酸上的O-糖链,连接在丝氨酸上的糖胺聚糖（GAGs）和连在脂类物质上的糖脂。糖链及其缀合物不仅参与生命活动的基本生理生化过程,而且在疾病的发生和发展中都发挥着重要作用。肿瘤细胞膜糖链可能发生重要变化,如过度或丧失表达某些原有结构,产生新的结构等。这些肿瘤细胞表面糖基异常化与肿瘤细胞的侵袭和转移有密切关系,其中比较常见是由于N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V（GnT-V）活性增强而导致的复杂型N-糖链β1,6分支高表达。随着基因组学、蛋白质组学的发展以及凝集素和质谱技术在糖链检测中的应用,越来越多与肿瘤相关的糖链的结构和功能被研究阐明,但是尚无文献针对不同周期时相的肿瘤细胞膜糖链表达对肿瘤细胞运动的影响进行阐述。本论文的研究目的是分析细胞膜糖链的表达和不同周期时相肿瘤细胞迁移的关系,实验主要包括三部分:1、不同周期时相小鼠乳腺癌4TO7细胞的制备论文中采用细胞同步化技术将4TO7细胞阻断在特定的周期时相,为下面实验奠定了基础。2、研究小鼠乳腺癌细胞4TO7在不同细胞周期时相的迁移及细胞膜糖链表达情况Transwell小室法结果显示各周期时相细胞都能够发生迁移,其中G2/M期细胞迁移为首次发现。实验结合BrdU掺入法和划痕法验证了S期和G2/M期细胞的迁移;同时我们使用了凝集素探针对同步化的G0/G1,G2/M期细胞和对数增长的各周期时相的4TO7细胞膜糖链表达进行分析,发现糖链结合的凝集素荧光强度无显著改变,其原因可能是糖链修饰的复杂性和微调性无法得到足够的优化放大。3、GnT-V和β1,6分支对G2/M期4TO7细胞迁移能力的影响β1,6分支是细胞膜复杂型N-糖链3、4天线中的一个分支结构,本实验室的前期实验中已经证明β1,6分支能够促进4TO7细胞的迁移,但此细胞膜糖链是否对处于不同周期的细胞的迁移能力具有相同的影响,尚无文献报道。本文应用秋水仙碱将细胞同步化于G2/M期,对GnT-V和β1,6分支表达降低的siRNA～3细胞的迁移行为进行了分析,结果显示相对于阴性对照细胞,处于G2/M期的siRNA-3细胞迁移能力显著降低。根据以上实验结果推测,β1,6分支在G2/M期的迁移中发挥了重要作用。
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