青藤碱抗缺血性脑损伤的作用及其机制

论文摘要

青藤碱（Sin）是一个来源于中国传统药用植物的生物碱,被广泛用于抗炎临床治疗中。最近研究发现Sin能通过降低细胞内Ca2+升高的幅度来对抗心肌缺血,或通过抑制小胶质细胞NADPH氧化酶来降低帕金森病（Parkinson’s disease, PD）中多巴胺的神经毒性。因为钙超载与促炎症细胞因子和缺血性脑损伤的发病机制密切相关,所以在本研究中我们探讨了Sin抗脑缺血损伤的神经保护作用和机制。我们发现,Sin抑制了OGD（氧糖剥夺）诱导的PC12细胞死亡;MCAO造模后的大鼠,给予Sin（10和30毫克/千克,i.p.）可以显著降低脑梗塞和水肿区面积。Sin作用的相关机制是下调缺血再灌注后炎症因子和凋亡相关基因表达和抑制氧化应激诱导的钙超载。这些结果表明,Sin可能治疗由中风引起的神经细胞损伤,减少脑缺血后遗症的发生。第一部分Sinomenine对离体缺血性脑损伤的保护作用目的:观察Sin在体外对神经细胞的保护作用,并通过钙离子成像技术观察Sin对胞内钙的作用。方法:（1）培养PC12细胞系,H2O2造模初步观察Sin的作用;（2）应用OGD损伤模型,观察Sin的作用;（3）观察Sin对OGD后胞内LDH水平的影响（;4）用HOECHST染色观察Sin的细胞保护作用;（5）用钙离子成像技术观察其对胞内钙离子浓度的影响。结果:（1）H2O2造模发现Sin可以对抗氧自由基引起的细胞损伤;（2）OGD模型观察Sin有良好的保护作用;（3）Sin减少了OGD处理后LDH的漏出率;（4）Sin对H2O2造模后PC12细胞凋亡有很好的保护作用;（5）Sin可以抑制H2O2造模后PC12细胞内钙离子的升高。结论:Sin可浓度依赖性对抗氧自由基所致的细胞损伤。第二部分Sinomenine的药代动力学目的:通过测定大鼠的血药浓度和药物组织分布,研究Sinomenine在大鼠体内的药物代谢动力学。方法:（1）用Sin饲养大鼠一段时间,血样经过处理后用HPLC法测定血药浓度,并得到血药浓度曲线;（2）用Sin饲养大鼠一段时间,取脑、肝、心的组织样本,经过处理后用LC-MS测定药物的组织分布。结果:（1）HPLC测定血浆药物回收率为68.6783.52%,血浆药物Tmax=10 min,Cmax=154.12μg/ml;（2）LC-MS测定Sin在肝、脑、心均有分布,其中,脑中药物浓度最低, Cmax为1.23μg/ml,给药后5 h内均能达到Sin有效浓度。结论:Sin可以透过血脑屏障到达靶部位发挥保护作用。第三部分Sinomenine对大鼠缺血性脑损伤的保护作用及其机制目的:观察Sin的抗大鼠脑缺血作用,并通过WESTERN BLOT对大鼠组织样本进行分析,研究其抗缺血作用机制。方法:（1）药物孵育脑片并进行OGD处理,观察不同情况下脑片fEPSP的恢复程度;（2）大鼠MCAO造模,观察正常组、模型组和给药组的脑缺血损伤情况;（3）用WESTERN BLOT实验比较组织样本的凋亡相关蛋白、炎症蛋白和钙调蛋白激酶Ⅱ的变化情况,研究Sin的作用机制。结果:（1）Sin对OGD诱导的脑片损伤有保护作用;（2）MCAO造模后,与模型组相比,10 mg/kg和30 mg/kg的Sin分别使脑水肿体积降低了70.30±6.29%和83.81±9.62%;（3）Sin抑制了炎症相关蛋白TNF-α、iNOS和凋亡蛋白Bax、Casepase-3的表达,上调了抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制了phospho-CaMKⅡ的表达。结论:Sinomenine抗大鼠脑缺血作用机制与抑制胞内钙、减少炎症因子产生和降低凋亡蛋白水平有关。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 前言
• 第一部分 Sinomenine 对离体缺血性脑损伤的保护作用
• 1. 材料与方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 小结
• 第二部分 Sinomenine 的药代动力学
• 1. 材料和方法
• 2. 浓度测定结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 小结
• 第三部分 Sinomenine 对大鼠缺血性脑损伤的保护作用及其机制
• 1. 材料和方法
• 2. 结果
• 3. 讨论
• 参考文献
• 小结
• 全文总结
• 综述
• 参考文献
• 致谢