丹参叶片不定芽的诱导及其成苗中丹酚酸B含量的测定

论文摘要

本研究以四川中江主栽丹参品种小叶型丹参（S. miltiorrhiza Bge. cv. foliolum）和野生型丹参（S. miltiorrhiza Bge. cv. silcestris）为材料,建立起无菌繁殖体系,并从中取得叶片进行离体培养,通过正交试验设计选择不同培养基和添加不同外源激素,筛选出丹参叶片不定芽再生的最适条件；然后采用完全随机二因素有重复试验设计,筛选出丹参叶片不定芽芽苗的最适生根条件。并在选出的最佳培养基上添加不同浓度的AgNO3,观察叶片在诱导、分化过程中的外观形态变化,分析不同浓度的AgNO3对野生型丹参叶片不定芽再生过程的影响。同时,采用HPLC,以丹参药材（根）以及田间栽培大叶型丹参（S. miltiorrhiza Bge. cv. sativa）和小叶型丹参（S. miltiorrhiza Bge. cv. foliolum）地下部分（根）和地上部分（茎段和叶片）为对照,测定小叶型丹参叶片不定芽诱导出的成苗中丹酚酸B的含量,分析叶片离体培养过程对小叶型丹参丹酚酸B含量的影响,对比了大叶型丹参和小叶型丹参植株不同部位中丹酚酸B含量的差异。并就不同浓度的甲醇溶液对丹酚酸B提取的影响进行了研究。试验结果如下：（1）利用正交试验设计筛选小叶型丹参和野生型丹参不定芽诱导最适培养条件,通过不定芽再生率、平均每叶块再生芽数以及再生力三个指标分析表明：小叶型丹参最适培养条件为MS+NAA0.3 mg·L-1+6-BA 1.5 mg·L-1,不定芽诱导率达到63.33%。野生型丹参最适培养条件为NN69+NAA0.2 mg·L-1+6-BA2.0 mg·L-1,不定芽诱导率达到73.33%。（2）采用完全随机二因素有重复试验设计筛选丹参叶片不定芽芽苗最适生根条件,通过生根率、平均根数、平均根长、平均株根鲜重和平均株根干重五个指标分析表明：小叶型丹参和野生型丹参最适生根条件均为1/2MS+IBA0.1mg·L-1,生根率分别达到86.16%和90.20%。（3） 3.0mg·L-1 AgNO3促进野生型丹参叶片不定芽再生的效果最明显,其不定芽再生率和再生力均最高,分别为95.56%和246.49。同时,叶片出芽时间较叶片在不添加AgNO3的培养基上的时间提前了,并且不定芽发生途径由间接发生途径为主转变为直接发生途径为主。（4）采用HPLC,以丹参药材（根）以及田间栽培丹参地下部分（根）和地上部分（茎段和叶片）为对照,测定小叶型丹参叶片不定芽诱导出的成苗中丹酚酸B的含量,结果发现：小叶型丹参经B5+NAA 0.3 mg·L-1+6-BA1.0 mg·L-1所得的芽苗丹酚酸B的含量最高,为0.3176 mg·g-1。高于田间栽培小叶型丹参和大叶型丹参植株地上部分中丹酚酸B的含量,分别为0.2170 mg·g-1和0.1416mg·g-1。低于丹参药材中丹酚酸B的含量。但是,综合考虑丹参叶片的不定芽再生率、每叶不定芽数（即再生力）和丹酚酸B的含量认为,MS+NAA 0.3 mg·L-1+6-BA 1.5 mg·L-1为小叶型丹参叶片不定芽诱导和丹酚酸B合成的最适培养基。同时还发现,小叶型丹参地上部分和根中丹酚酸B的含量均分别高于大叶型丹参地上部分和根中丹酚酸B的含量,其含量分别为0.2170 mg·g-1,34.8371 mg·g-1和0.1416 mg·g-1,19.5881 mg·g-1。（5）精密量取75%甲醇溶液50.0mL,置具塞锥形瓶中,密塞,称定重量,加热回流1 h为提取大叶型丹参地上部分丹酚酸B的最适提取方法。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 1. 前言
• 2. 文献综述
• 2.1 丹参离体培养研究进展
• 2.1.1 基因型
• 2.1.2 外植体
• 2.1.3 基本培养基
• 2.1.4 植物生长物质
• 2.1.5 培养条件
• 3'>2.1.6 AgNO₃
• 2.2 丹参水溶性成分的研究进展
• 2.2.1 丹参的水溶性成分
• 2.2.2 离体培养中影响丹参水溶性成分合成积累的因素
• 2.2.3 丹参地上部的药用成分
• 2.2.4 丹酚酸B的药理作用
• 2.2.5 丹酚酸B的提取和含量测定
• 3. 研究的目的与意义
• 4. 材料与方法
• 4.1 试验材料
• 4.2 技术路线
• 4.3 试验方案及方法
• 4.3.1 丹参叶片不定芽诱导
• 4.3.2 丹参叶片不定芽芽苗生根
• 4.3.3 丹参试管苗中丹酚酸B的测定
• 5. 结果与分析
• 5.1 丹参叶片不定芽诱导
• 5.1.1 丹参叶片不定芽的发生过程
• 5.1.2 诱导培养基对丹参叶片不定芽诱导的影响
• 3对丹参叶片不定芽诱导的影响'>5.1.3 AgNO₃对丹参叶片不定芽诱导的影响
• 5.2 丹参叶片不定芽芽苗根的诱导
• 5.2.1 丹参叶片不定芽芽苗的生根过程
• 5.2.2 生长调节剂组合对丹参叶片不定芽芽苗生根的影响
• 5.3 丹酚酸B含量的测定
• 5.3.1 丹酚酸B测定方法的确立
• 5.3.2 不同浓度的甲醇溶液对丹酚酸B提取的影响
• 5.3.3 丹参试管苗中丹酚酸B含量的测定
• 6. 讨论
• 6.1 基因型的影响
• 6.1.1 基因型对丹参离体培养的影响
• 6.1.2 基因型对丹酚酸B含量的影响
• 6.2 基本培养基的影响
• 6.2.1 基本培养基对丹参离体培养的影响
• 6.2.2 基本培养基对丹酚酸B含量的影响
• 6.3 植物生长调节剂的影响
• 6.3.1 植物生长调节剂对丹参离体培养的影响
• 6.3.2 植物生长调节剂对丹酚酸B含量的影响
• 3浓度对丹参叶片不定芽再生的影响'>6.4 不同AgNO₃浓度对丹参叶片不定芽再生的影响
• 6.5 不同浓度的甲醇溶液对丹酚酸B提取的影响
• 7. 进一步研究的内容
• 8. 参考文献
• 致谢
• 硕士学习期间发表文章
• 版图说明