安徽省临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌的耐药性变迁及相关耐药机制

论文摘要

目的了解2005-2010年安徽省临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌对临床常见药物的敏感性及耐药性变化,对其医院感染特征进行多因素分析,探寻引起医院感染的相关危险因素,并通过基因同源性分型,推测菌株地流行性趋势,为控制医院感染的发生提供科学的理论依据。检测2005-2008年4年期间收集的临床分离嗜麦芽窄食单胞菌耐药基因型及获得性耐药特性并分析其与耐药表型的关系,从而为嗜麦芽窄食单胞菌感染的防治提供理论依据和对策。材料与方法菌株来源收集安徽省细菌耐药性监控网中的34家不同级别医院2005年至2010年6年期间每年9月份的临床分离嗜麦芽窄食单胞菌188株,采用全自动微生物分析仪对标本进行重新鉴定。方法根据2009年美国临床与实验室标准委员会推荐的的标准,采用琼脂平皿稀释法,开展188株安徽省细菌耐药性监控中心收集的嗜麦芽窄食单胞菌对临床常用6种抗菌药物进行药物敏感实验,应用随机引物PCR方法对菌株进行基因分型分析菌株克隆流行传播情况,并对药敏结果及对其医院感染特征进行统计学分析。对2005-2008年收集的102株嗜麦芽窄食单胞菌提取全基因组DNA,采用PCR方法检测β-内酰胺酶、喹诺酮耐药基因qnr、复方磺胺耐药基因sul和dfrA,分析耐药基因与耐药表型的关系;并采用PCR方法对这些菌株扩增各类整合子。对Ⅰ类整合酶阳性菌株扩增可变区检测其携带的耐药基因盒,可变区阳性片断PCR产物凝胶电泳后各片段纯化后克隆入T载体,表达于感受态细胞E. coli JM109后提取质粒测序,结果至GenBank比对,进行DNA序列分析,了解整合子携带的各种耐药基因。对sul2基因阳性菌株采用热不对称交错PCR和测序的方法,研究sul2基因3’端和5’端未知侧翼碱基序列,结果至GenBank比对,进行DNA序列分析。以了解该耐药基因是否与整合子、插入序列（ISCR）及转座子相连,初步预测该基因是否可能导致快速的水平或垂直传播。结果我们分析本地区2005-2010年嗜麦芽窄食单胞菌在常见非发酵菌的感染比率,发现嗜麦芽窄食单胞菌临床感染率从2005至2009年有逐年上升趋势,其中2005年到2008年区间和2005年到2009年区间该菌感染增长率变化显著,差异有统计学意义。188株嗜麦芽窄食单胞菌主要来源于医院的ICU、呼吸内科、干部病房、神经内科,痰标本分离达到153株,70%以上的感染者在70岁以上。安徽省地区188株嗜麦芽窄食单胞菌对临床常用抗菌药物敏感性以米诺环素最强达到79%,其次为左氧氟沙星、复方磺胺甲基异恶唑,敏感率大于60%,对替卡西林/克拉维酸、氯霉素的敏感性较差,敏感率低于50%。通过检测嗜麦芽窄食单胞菌2005至2010年耐药性变化,发现左氧氟沙星、氯霉素、替卡西林/克拉维酸、米诺环素的耐药性变化不大,头孢他啶耐药率变化均有统计学意义,复方磺胺甲基异恶唑耐药率从2005年至2010年有增高趋势。对188株基因分型,发现2005年、2007年及2009年的菌株均表现不同的基因亚型;2006年678和702号、2008年的824和826号、2010年的186和187号菌株分别是同一基因亚型,追踪临床资料发现它们分别是同一医院同一科室,因此说明这些医院当时可能存在同一克隆株的传播情况。2005-2008年的102株嗜麦芽窄食单胞菌L1基因阳性率76.47%,L2基因阳性率67.65%;其中L1和L2型基因共同阳性率56.86%。102株QnrX、QnrY和QnrZ的阳性率都是100%。102株嗜麦芽窄食单胞菌52株sul1基因阳性（50.98%）,其中25株对复方磺胺耐药;13株sul2基因阳性（12.75%）,并且这13株对复方磺胺耐药都耐药;16株中检测到dfrA基因:1株携带dfrA1基因,8株携带dfrA12基因,7株携带dfrA17基因,在16株中有15株同时携带sul1或sul2基因,并且这15株对复方磺胺都耐药。102株嗜麦芽窄食单胞菌中66株Ⅰ类整合酶基因阳性,阳性率64.71%,其中48株检测到耐药基因盒,我们检测到的携带甲氧苄啶和氨基糖苷类耐药基因dfrA12–aadA2、氨基糖苷类和氯霉素耐药基因aacA4–catB8–aadA1、氨基糖苷类和β-内酰胺类耐药基因aadB–aac（6′）-Ⅱ–blaCARB-8、氨基糖苷类和利福平耐药相关基因arr-3-aacA4的DNA碱基及氨基酸序列已递交GenBank,获得的基因序列号分别是GQ981416、GQ906532、GQ866976、GU137303。102株嗜麦芽窄食单胞菌中52株检测到sul1基因,其中43株还同时检测到I类整合酶。31株耐复方磺胺菌株中29株检测到整合子（dfrA17–aadA5、dfrA12–aadA2、aadB–aadA4、aacA4–catB8–aadA1）,另2株检测到sul1和sul2基因。在19株对复方磺胺敏感菌株中检测到的I类整合子整合的耐药基因盒有aacA4、aadA5、aadA1、aadB–aac（6′）-Ⅱ–blaCARB-8、arr-3–aacA4和cmlA1。102株嗜麦芽窄食单胞菌中没有检测到Ⅱ类和Ⅲ类整合子。sul2基因阳性菌株sul2基因3’端和5’端未知侧翼碱基序列研究结果显示:3’端相连的核苷酸序列编码的是保守的假设性蛋白质,5’端相连的核苷酸序列编码的是保守的2型二氢喋呤合成酶和转座酶基因。结论安徽省地区嗜麦芽窄食单胞菌造成的临床感染表现为逐步增高的趋势,嗜麦芽窄食单胞菌有造成医院感染流行的隐患。安徽省临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌染色体中普遍存在的喹诺酮耐药基因qnr,染色体中qnr基因与氟喹诺酮类药物耐药性并无相关性。嗜麦芽窄食单胞菌sul1基因单独存在时并不一定导致复方磺胺药的抗药性增加,同时和sul2基因或dfrA基因并存会导致对复方磺胺药的高耐药性。本地区嗜麦芽窄食单胞菌Ⅰ类整合子普遍存在,检测到的耐药基因盒有:磺胺甲基异噁唑耐药基因、甲氧苄啶耐药基因、氨基糖苷类耐药基因、氯霉素耐药基因、β-内酰胺类耐药基因和利福平耐药相关耐药基因盒,整合子整合的耐药基因与临床常见抗菌药物尤其是复方磺胺甲噁唑耐药性密切相关。sul2基因的5’端和转座酶基因相连,转座子可能会加速sul2基因在菌株间的传播导致嗜麦芽窄食单胞菌对复方磺胺甲噁唑耐药率增强。

论文目录

• 一、缩略词表
• 二、摘要（安徽省临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌的耐药性变迁及相关耐药机制）
• 中文摘要
• 英文摘要
• 三、第一部分 正文（安徽省临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌临床分布及耐药性）
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 四、第二部分 正文（嗜麦芽窄食单胞菌的固有耐药性及获得性耐药机制）
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 参考文献
• 五、附录
• 个人简历
• 发表论文
• 在读期间获荣誉及参加学术交流情况
• 致谢
• 综述
• 参考文献