阻滞电压门控性钾离子通道(Kv1.3)对大鼠动脉粥样硬化斑块发生发展的影响

论文摘要

近年来的研究表明急性冠脉综合征（ACS）的发生发展和炎症有关,其中不稳定性斑块破裂和炎症状态的扩散是导致病人急性冠脉综合症发作的主要原因。细胞介导的炎症反应,尤其是T淋巴细胞介导的炎症反应在斑块破裂的机制中起到了非常重要的作用。以往的研究表明粥样斑块内的大多数T淋巴细胞为CD4+的辅助性T淋巴细胞。本实验室的近期研究证实急性冠脉综合征患者外周血中活化的CD4+T淋巴细胞Kvl.3钾离子通道数目增加,应用Kvl.3离子通道阻滞剂对急性冠脉综合征患者外周血中活化的CD4+T淋巴细胞功能有抑制作用。我们实验室的研究还证明急性冠脉综合征患者外周血的淋巴细胞Kvl.3离子通道蛋白质表达高于健康对照人群。然而应用Kvl.3钾离子通道阻滞剂是否对动脉粥样硬化的进展有抑制作用尚待进一步研究。本研究通过建立大鼠动脉粥样硬化斑块模型,同时应用KVl.3钾离子通道阻滞剂PAP-1干预,以了解KVl.3钾离子通道阻滞剂对大鼠动脉粥样硬化斑块的影响及可能的机制。目的探索一种建立实验性大鼠不稳定性动脉粥样硬化斑块的可行方法。方法40只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（C组）、大鼠胸主动脉粥样硬化斑块模型组（A1,A2,A3组）,每组各10只。A1,A2模型组大鼠使用高脂饲料+维生素D3复合造模,A3组大鼠使用高脂饲料+维生素D3+大鼠血管内皮球囊损伤复合造模。A1组大鼠喂食高脂饲料1,A2和A3组大鼠喂食高脂饲料2。C组大鼠喂食普通标准饲料。16周后检测各组大鼠身长体重及血浆血脂水平,观察胸主动脉病理学变化,流式检测外周血T淋巴细胞的百分含量。结果各组模型组大鼠血脂总胆固醇（TC）和低密度脂蛋白（LDL-C）水平明显高于对照组C组。A1组大鼠因造模过程中食欲严重低下,16周末死亡6只,剩余4只生长发育缓慢。A2,A3组大鼠体型肥胖。C组大鼠生长发育正常。主动脉苏木素-伊红（HE）染色显示,A3组大鼠胸主动脉形成了不稳定性动脉粥样斑块,A1,A2组大鼠胸主动脉只观察到了动脉壁硬化,C组大鼠呈现正常形态的胸主动脉。C组,A1组,A2组大鼠外周血T淋巴细胞百分含量显著低于A3组大鼠,A1,A2组大鼠外周血T淋巴细胞百分含量较C组大鼠轻微升高,但差异无显著意义。结论高脂饲料的配方及大鼠动脉内膜的损伤对建立大鼠不稳定性动脉粥样斑块模型有着至关重要的影响,利用特殊的高脂配方饲料加上维生素D和球囊损伤血管内膜可以建立一种可行的实验性大鼠不稳定性动脉粥样斑块模型。目的研究小分子KVl.3钾离子通道阻滞剂PAP-1对大鼠动脉粥样硬化斑块发生发展的影响及可能的机制。方法30只雄性Wistar大鼠随机分为对照组（C组）、大鼠动脉粥样硬化斑块模型组（A组）和PAP-1治疗组（P组）。建立大鼠动脉粥样硬化斑块模型。16周后检测各组大鼠血浆血脂水平,观察大鼠主动脉弓和左颈总动脉的病理学变化,流式分析大鼠外周血淋巴细胞免疫表型的变化,ELISA法检测大鼠血浆高敏C反应蛋白（hs-CRP）、r-干扰素和穿孔素的含量以及western印迹法检测外周血淋巴细胞Kvl.3通道蛋白的表达。结果P组及A组大鼠血浆C反应蛋白（CRP）、低密度脂蛋白（LDL-C）水平和总胆固醇（TC）的水平明显高于C组。A组大鼠左颈总动脉和主动脉弓形成了不稳定动脉粥样硬化斑块,P组大鼠左颈总动脉和主动脉弓只观察到了动脉壁的硬化,对照组大鼠呈现正常形态的主动脉弓和左颈总动脉。C组大鼠外周血CD3+CD4+CD28-T淋巴细胞百分含量均显著低于A组和P组大鼠,但CD3+CD4+CD28-T淋巴细胞百分含量在A组和P组大鼠之间比较差异无统计学意义。A组和P组大鼠血浆穿孔素水平较C组增加,和A组相比,P组大鼠血浆穿孔素水平降低。三组大鼠血浆r-干扰素水平差异无统计学意义。A组和P组大鼠外周血T淋巴细胞Kvl.3蛋白表达较C组增加,和A组相比,P组Kvl.3蛋白表达降低。结论KVl.3钾离子通道阻滞剂PAP-1能抑制大鼠动脉粥样硬化斑块的形成和发展,可能是通过抑制T淋巴细胞KVl.3钾离子通道的表达,从而进一步影响T淋巴细胞的激活和某些功能。

论文目录

• 主要英文缩略词表
• 中文摘要
• Abstract
• 前言
• 参考文献
• 第一部分 实验性大鼠不稳定性动脉粥样斑块的建立
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 第二部分 小分子电压门控性钾离子通道（KV1.3）阻滞剂PAP-1对大鼠动脉粥样硬化斑块发生发展的影响
• 前言
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 参考文献
• 总结与创新
• 综述
• 参考文献
• 附录
• 致谢