宫颈ASCUS中P16INK4A、△NP63、Brn3α和HPV的表达及临床意义

论文摘要

目的:研究宫颈ASCUS中P16INK4A、ΔNP63、HPV和Brn-3α的表达情况及各标志物之间的相关性,了解ASCUS的分子生物学特征,并分析ASCUS患者的临床和病理特征,探讨生物标志物对于筛查ASCUS中瘤变亚型的价值,寻找有效的筛查ASCUS瘤变型的方法,在分子水平探索宫颈细胞早期瘤变发生的机理,并评估采用分子生物学技术对宫颈早期病变诊断的指导意义。方法:1.对2007年3月-2007年8月在重庆医科大学附属第一医院150例TCT诊断为ASCUS患者行阴道镜检查,并取活组织或刮取颈管组织送病检,收集其临床病理资料。2. 150例ASCUS患者TCT残留标本重新制片,采用SP免疫细胞化学染色检测标本中P16INK4A、ΔNP63的表达,了解ASCUS中P16INK4A、ΔNP63的表达及临床应用价值。3.利用150例ASCUS患者TCT残留标本提取RNA,用RT-PCR法分别检测其中HPV16E7、HPV18E6和Brn-3αmRNA的表达,了解ASCUS中HPV16E7、HPV18E6和Brn-3αmRNA的表达及临床应用价值。结果:1. ASCUS的临床处理及结果分析:（1）150例ASCUS患者均行阴道镜检查并取活检。病理诊断为炎症92例（61.33%）,CINⅠ20例（13.33%）,CINⅡ17例（11.33%）,CINⅢ12例（8%）,湿疣或湿疣样变8例（5.33%）,有1例为浸润性宫颈癌。阴道镜与病理诊断符合率为68%;（2）150例ASCUS患者根据病理结果进行相应处理后随访,随访时间3-9个月。92例炎症者每4-6月随访一次,有2例分别在4月和6月随访时发现病变,经病理证实均为CINⅠ。20例CINⅠ患者浅切或锥切术后3月随访TCT均正常;30例CINⅡ/Ⅲ和宫颈癌患者行锥切术或子宫切除术后3月复查1例为ASCUS,术后6月再次复查正常;8例湿疣或湿疣样变者6例行浅切术或锥切术,术后给予抗病毒治疗,3月、6月随访TCT或阴道镜均正常,2例直接抗病毒治疗,3月复查1例正常,1例为ASCUS。2. ASCUS中P16INK4A和ΔNP63表达及临床意义:（1） P16INK4A和ΔNP63在ASCUS中的阳性率分别为37.33%和39.33%,主要表达于异常鳞状上皮细胞中,P16INK4A定位于胞浆和部分胞核,ΔNP63定位于胞核。随着ASCUS患者病理级别的加重, P16INK4A的染色强度和阳性率也增加,在炎症、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、湿疣及湿疣样变中P16INK4A和ΔNP63的阳性率分别为5.43%、80%、88.24%、100%、87.5%和6.52%、85%、91.12%、100%、87.5%,1例宫颈癌中P16INK4A和ΔNP63均为强阳性表达。各病理级别间阳性率比较差异有显著性意义（P<0.05）。（2） P16INK4A、ΔNP63及二者联合检测对筛查ASCUS中瘤变亚型的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值分别为0.88、0.95、0.91、0.93和0.91、0.93、0.89、0.95和0.97、0.92、0.89、0.98,均高于阴道镜的筛查值。在P16INK4A和ΔNP63阳性的样本中,宫颈癌及癌前病变发生率为88.89%,而阴性样本中,发病率仅为2.30%,差异有显著性意义（P<0.05）。3. ASCUS中HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α的表达及临床意义:（1）HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3αmRNA在ASCUS中的阳性率分别为46.67%和36%。随着ASCUS患者病理级别的加重,HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α的阳性率也随之增加,在炎症、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和湿疣及湿疣样变中分别为25%、75%、88.25%、100%、50%和14.13%、60%、70.59%、91.67%、62.5%,各病理级别间阳性率的差异有显著性意义,且宫颈癌前病变中的阳性率均明显高于炎症组（P<0.05）。（2）检测HPV16 E7/HPV18 E6、Brn-3α和联合检测二者mRNA的表达对筛查ASCUS瘤变亚型的灵敏度、特异度、阳性和阴性预测值分别为0.81、0.75、0.67、0.86和0.71、0.86、0.76、0.82和0.86、0.74、0.68和0.89。HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α阳性的ASCUS患者中,宫颈癌及癌前病变的发生率分别为67.14%和75.93%,均明显高于阴性患者的发生率13.75%和17.71%（P<0.05）。4. P16INK4A、ΔNP63、HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α在ASCUS表达的相关性:四项指标在ASCUS中病理诊断为宫颈癌和癌前病变的样本中表达增高,并且四项指标表达具有相关性,P16INK4A和ΔNP63、P16INK4A和HPV16 E7/HPV18 E6、HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α在ASCUS中的表达均具有较高的一致性。5. P16INK4A、ΔNP63、HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α与ASCUS患者的随访及预后的关系:ASCUS患者根据病理结果进行相应处理后随访3-9月,92例炎症中2例病变进展为CINⅠ,其中1例P16INK4A、ΔNP63、HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α均为阳性,另1例P16INK4A、HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α阳性;49例CIN患者行锥切或子宫切除后随访有1例四项指标均为阳性者术后3月TCT为ASCUS,其余随访均正常;8例湿疣及湿疣样变者6例行浅切术或锥切术,术后随访正常,2例直接抗病毒治疗,随访3月后1例为ASCUS,其P16INK4A、ΔNP63、HPV和Brn-3α表达均为阳性,另1例正常。结论:1. ASCUS中含有潜在的高度病变,筛查出其中瘤变亚型并进行规范化处理对降低宫颈病变发生率有重要意义。2. ASCUS中病理诊断为宫颈癌及癌前病变的样本中P16INK4A、△NP63、HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α呈高表达,对筛查ASCUS中宫颈癌及癌前病变的敏感性、特异性、阳性和阴性预测值均较高,尤其是联合检测P16INK4A和△NP63,提示P16INK4A、△NP63、HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α的检测能提高ASCUS筛查的效益,有望成为ASCUS分型的特异性生物标志物。3. P16INK4A、△NP63、HPV16 E7/HPV18 E6和Brn-3α在宫颈癌及癌前病变中的表达随着病理级别的加重而增加,并且,P16INK4A和ΔNP63、P16INK4A和HPV、HPV和Brn-3α的表达具有较高的一致性,表明各标志物间相互作用,参与了宫颈细胞瘤变的过程,并推动宫颈细胞瘤变的发生发展。4. HPV16 E7/HPV18 E6能直接反映ASCUS患者体内HPV的活化状态,而与P16INK4A及Brn-3α与HPV16 E7/HPV18 E6表达的一致性,则表明P16INK4A及Brn-3α可间接反应ASCUS患者体内HPV的转录活化水平,三者均可用于评估HPV感染后的致瘤能力。

论文目录

• 英汉缩略语对照
• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 第一部分 细胞学诊断为ASCUS 的临床处理和结果分析
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• INK4A、ΔNP63 的表达及临床意义'>第二部分 ASCUS 中P16^INK4A、ΔNP63 的表达及临床意义
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 第三部分 ASCUS 中HPV16E7/HPV18E6 和 Brn-3αmRNA 表达水平及临床意
• 材料与方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 全文小结
• 附图
• 参考文献
• 文献综述：P63 基因与宫颈癌及癌前病变
• 致谢
• 攻读学位期间发表学术论文目录