论文摘要
目的 脓毒症（Sepsis）是严重烧伤、创伤的常见并发症,其病死率较高,因此研究脓毒症的发病机制及防治措施具有重要意义。未甲基化的CpG寡核苷酸片段（CpG oligonucleotides,CpG ODN）是细菌DNA的免疫刺激作用的最小作用单位,是强有力的免疫调节剂。近年来研究发现,CpG DNA可以增强小鼠和鸡抵抗多种细菌导致的脓毒症,作用机制可能与其抑制单核/巨噬细胞释放致炎细胞因子如TNF-α、IL-6等有关。为此,本研究旨在明确小剂量CpG DNA预处理对细菌脓毒症模型小鼠的保护作用的基础上,研究CpG DNA预处理拮抗细菌脓毒症的作用机制,为CpG DNA的可能临床应用提供实验依据。 方法 ① RAW264.7细胞经生理盐水（NS）、CpG DNA预处理后,再给予大剂量CpG DNA刺激细胞,观察小剂量CpG DNA预处理对大剂量CpG DNA刺激细胞释放TNF-α的抑制作用,并明确其量效、时效关系;② 采用尾静脉注射LD90热灭活大肠杆菌,建立细菌脓毒症小鼠模型,观察小剂量CpG DNA预处理的保护作用;③ 采用流式细胞术观察小剂量CpG DNA预处理对RAW264.7细胞表面DNA结合能力及DNA内化的影响;④ 采用免疫细胞化学、流式细胞术、激光共聚焦术观察小剂量CpGDNA预处理对胞膜TLR9及胞内TLR9表达的影响;⑤ 采用电泳迁移率改变分析（EMSA）方法观察CpG DNA预处理对细胞NF-кВ活化的抑制作用。 结果 ① 4μg/ml CpG DNA预处理RAW264.7细胞24 h能显著抑制大剂量CpGDNA（20μg/ml）诱导的TNF-α释放,并呈明显的量效和时效关系;② 2.5 mg/kg CpGDNA预处理3天能显著降低热灭活大肠杆菌攻击小鼠的死亡率,死亡率由90%降低至40%;③ 小剂量CpG DNA预处理显著抑制细胞表面DNA结合,减少DNA内化;④小剂量CpG DNA预处理能显著抑制胞内TLR9的表达,却增强胞膜TLR9的表达;⑤ 小剂量CpG DNA预处理抑制大剂量CpG DNA诱导的核转录因子NF-кВ的活化。 结论 小剂量CpG DNA预处理对细菌脓毒症模型小鼠具有显著的保护作用,其
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