透明质酸对山羊卵母细胞体外成熟和孤雌胚发育的影响

论文摘要

近年来,胚胎移植的商业应用和各种胚胎工程等方面的研究和开发都需要大量的优质早期胚胎。胚胎的来源和成本已成为制约胚胎工程实用化的重要因素。把卵母细胞进行体外成熟培养和体外受精后,便可获得大量廉价的优质早期胚胎,既克服了超数排卵技术的局限性,又可满足科研和生产对胚胎的需求。为获得大量优质廉价的早期胚胎,满足胚胎工程研究和生产的需要,本试验进行了山羊卵巢卵母细胞体外成熟培养与孤雌胚培养的研究。本实验主要研究透明质酸(HA)对山羊卵母细胞体外成熟和孤雌胚发育的影响。实验第一部分研究了HA对山羊卵母细胞体外成熟的影响。实验1研究了不HA对山羊卵母细胞无血清培养体系的影响。结果表明,添加一定浓度HA的无血清培养液组比未添加HA的无血清培养液组的卵母细胞成熟率高,当HA浓度在1.0～1.5mg/mL时显著高于不添加HA的对照组。说明HA可以促进卵母细胞成熟,优化无血清培养体系,且HA浓度为1.0～1.5mg/mL时最有利于卵母细胞成熟。实验2比较了优化后的无血清培养液和FBS、EGS两种血清培养液培养卵母细胞的成熟率,结果表明无血清培养液组的卵母细胞成熟率显著低于EGS组,但是和FBS组差别不大。实验第二部分研究了HA对山羊孤雌胚体外发育的影响。实验1研究了不同浓度的HA对孤雌胚发育的影响。结果表明,HA可以提高早期胚胎发育的囊胚率,且浓度为1.5mg/mL时效果最好,浓度过高或者过低都不能取得显著效果。实验2比较了含有HA的无血清培养液组和FBS组以及OCS组的孤雌胚囊胚率,结果表明无血清培养液组的囊胚率低于FBS组和EGS组,显著低于EGS组(P<0.05),但是和FBS组差异并不显著(P>0.05),FBS组和EGS组相比差异不显著(P>0.05)。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 卵母细胞体外成熟研究进展
• 1.1 卵母细胞核质成熟机制
• 1.1.1 卵子发育过程中的结构变化
• 1.1.2 卵母细胞体外核质成熟的抑制
• 1.2 卵母细胞成熟的基本过程
• 1.2.1 MⅡ期卵母细胞的维持机制
• 1.2.2 MⅡ期卵母细胞的激活机制
• 1.3 卵母细胞体外成熟培养
• 1.3.1 研究概况
• 1.3.2 卵母细胞体外成熟培养
• 1.3.3 卵母细胞体外成熟的判定标准
• 第二章 卵母细胞孤雌激活研究进展
• 2.1 孤雌激活的方法
• 2.1.1 电脉冲激活
• 2.1.2 乙醇激活
• 2.1.3 钙离子载体
• 2+)'>2.1.4 锶离子(Sr²⁺)
• 2.1.5 蛋白质合成抑制剂
• 2.1.6 联合激活
• 2.1.7 蛋白磷酸化抑制剂激活
• 2.2 孤雌胚的发育
• 2.2.1 孤雌胚的核型
• 2.2.2 孤雌胚发育
• 2.3 雌性和雄性基因组在个体发育中的作用
• 2.4 卵母细胞激活和孤雌胚发育研究的意义和展望
• 第三章 透明质酸对山羊卵母细胞体外成熟的影响
• 3.1 材料和方法
• 3.1.1 试剂与用品
• 3.1.2 仪器设备
• 3.1.3 卵巢的采集
• 3.1.4 卵母细胞的收集
• 3.1.5 卵母细胞的成熟培养
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同浓度的HA 对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.2.2 EGS,FBS 和含HA 的无血清培养体系对卵母细胞成熟的影响
• 3.3 讨论
• 3.3.1 不同浓度的HA 对卵母细胞体外成熟的影响
• 3.3.2 EGS,FBS 和含HA 的无血清培养体系对卵母细胞成熟的影响
• 3.4 结论
• 第四章 HA 对山羊孤雌胚体外发育的影响
• 4.1 材料和方法
• 4.1.1 试剂与用品
• 4.1.2 仪器设备
• 4.1.3 卵巢的采集
• 4.1.4 卵母细胞的收集
• 4.1.5 卵母细胞的成熟培养
• 4.1.6 成熟卵母细胞的孤雌激活
• 4.1.7 孤雌胚的体外培养
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 不同浓度的HA 对山羊孤雌胚发育的影响
• 4.2.2 FBS、OCS 和含HA 的无血清培养液对山羊孤雌胚发育的影响
• 4.3 讨论
• 4.3.1 不同浓度的HA 对山羊孤雌胚发育的影响
• 4.3.2 FBS、OCS 和含HA 的无血清培养液对山羊孤雌胚发育的影响
• 4.4 结论
• 结论
• 参考文献
• 致谢
• 作者简介