肝局灶性结节性增生、肝细胞腺瘤及肝细胞癌中微卫星杂合性丢失研究

论文摘要

目的：肝细胞腺瘤（HCA）和局灶性结节性增生（FNH）是发生于结构正常或基本正常肝脏的良性病变。已经知道前者是一种肿瘤性病变,具有特征性的分子病理学改变,而后者的性质及发病机制尚未被阐明。本研究选取多个与HCC发生有关联的微卫星标志,以期能够揭示FNH和HCA中的染色体等位基因杂合性丢失（LOH）在肝肿瘤发生、发展中的作用。方法：选取5例经典型FNH,9例HCA和18例分化好的（Edmondson I或Ⅱ级）肝细胞肝癌（HCC）,通过聚合酶链式反应（PCR）扩增57个微卫星位点,应用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳显示LOH。通过免疫组织化学方法对9例肝腺瘤检测β-catenin蛋白表达。结果：18例HCC均为乙型肝炎病毒感染,其中一例同时合并丙型肝炎病毒感染。所有HCC标本中均可检测LOH,单一病例发生LOH的微卫星均数为4个（0-12）。57个检测的位点中,33个（58%）被累及,6个在这些HCC标本中呈现高频（≥30%）LOH,位于6q、8p、11p、16q和17p。9例HCA中,2例伴有不典型增生（即小细胞性改变,SCC）,β-catenin免疫组织化学检测均显示胞膜阳性,未见明确胞浆和胞核阳性。9例HCA均显示有等位基因失衡,累及16个（28%）位点,其中8个为高频位点,位于11p、13q和17p。单个HCA病变发生LOH位点均数为3个（1-5）。5例FNH中均未检测到SCC改变,LOH检测均为阴性。然而,这些FNH标本中都可以见到多个透明细胞为主型的变异肝细胞病灶（FAH）和结节（NAH）,后一种病变构成FNH中多数体积较大（直径>1 mm）的小结节。选取NAH较多且明显的1例FNH病变,应用显微切割分离了25个NAH,其中13个病变多数微卫星位点扩增成功。这些NAH病变均显示出LOH,共累及21个（37%）位点,其中6个为高频位点,位于8p、11p、13q和17p。单个病变发生LOH的位点均数为4个（1-6）。不同NAH病变之间LOH组型也不相同,显示是互相独立的病变个体。NAH、HCA和HCC的LOH位点分布不同,频率最高的位点分别是D8S298（70%）、D11S1301 （75%）和D6S1008 （50%）。这三种病变中,NAH中发生LOH的位点累及染色体区域与HCA基本相似。然而,前者中8p发生LOH的频度高于后者；NAH与HCA在16q改变中也不相同,前者累及7个位点中的5个,后者仅累及1个。结论：分化较好的HCC中存在广泛的等位基因失平衡,高频率LOH位点定位于染色体6q、8p、11p、16q和17p；HCA中也存在LOH,但分布较为局限,高频位点位于11p、13q和17p。FNH中未检测到LOH,与其多克隆特征一致,但组织学检查发现广泛存在FAH和NAH。对显微切割的不同NAH微卫星位点检测显示,所有小结节均存在LOH,提示他们都已经属于肿瘤性病变；NAH中LOH高频位点位于8p、11p、13q和17p,与HCA相似。来自同一FNH的不同NAH病变具有不同的LOH组型,显示它们相互独立。这组数据提示,经典FNH中小结节状的组织学改变实际上反映了多个NAH的成簇发生。

论文目录

• 一 目录
• 二 摘要
• 中文摘要
• 英文摘要
• 三 论文
• 前言
• 材料和方法
• 结果
• 讨论
• 结论
• 四 参考文献
• 五 综述一
• 六 综述二
• 七 致谢