论文题目: 人α1，2岩藻糖苷转移酶（HT）基因转移及其抗异种移植免疫排斥的研究
论文类型: 博士论文
论文专业: 外科学
作者: 马志方
导师: 马腾骧,王广有
关键词: 异种移植,异种抗原,内皮细胞,岩藻糖苷转移酶,半乳糖,半乳糖,基因转移,聚合酶链式反应,反转录聚合酶链式反应,流式细胞术,选择素,细胞间黏附分子,核因子,酶联免疫吸附测定,免疫细胞化学,显微注射
文献来源: 天津医科大学
发表年度: 2005
论文摘要: 第一部分 人HT基因在猪细胞的表达 目的 运用分子生物学和基因工程技术构建含人α1,2岩藻糖苷转移酶(HT)基因的重组质粒pcDNA3-HTcDNA并在猪细胞表达,合成H抗原,同时降低异种抗原α-Gal的表达。方法 用Hind Ⅲ/Xba Ⅰ双酶切pRc/CMV-HTcDNA和pcDNA3质粒,将切下来的HTcDNA定向连接在pcDNA3质粒,构建pcDNA3-HTcDNA重组质粒,对其进行PCR、多酶切和测序鉴定。建立猪主动脉内皮细胞原代培养、猪髂动脉内皮细胞(PIEC)系和猪肾PK-15细胞系传代培养的方法。采用脂质体转染法将pcDNA3-HTcDNA转染上述猪细胞,新霉素(G418)筛选具有抗性的细胞克隆,用PCR检测重组HT基因的整合,RT-PCR检测重组HT基因mRNA的表达,流式细胞术(FCM)检测转染细胞H抗原和异种抗原α-Gal的表达。分别以未转染的相应正常猪细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为对照。结果 重组质粒转染3种猪细胞经筛选均得到抗性细胞克隆,PCR扩增出人HT基因片段,RT-PCR证实人HT基因mRNA在猪细胞表达,FCM检测转染细胞H抗原表达升高,α-Gal表达明显降低。结论 转移的重组人HT基因可以在猪细胞表达,合成H抗原,同时降低异种抗原α-Gal的表达。选用巨细胞病毒(CMV)启动子可以使人HT基因在各种猪细胞广泛表达。 第二部分 转人HT基因猪动脉内皮细胞抗异种移植排斥功能试验 目的 探讨转人HT基因猪动脉内皮细胞抗异种移植排斥反应的作用和机制。方法 1.将转人HT基因的猪动脉内皮细胞和正常内皮细胞分别与20%、40%和60%等不同浓度的人血清孵育2小时,采用非放射性细胞毒性分
论文目录:
中文摘要
英文摘要
引言
第一部分 人HT基因在猪细胞的表达
实验一 pcDNA3-HTcDNA重组质粒的构建
实验二 猪动脉内皮细胞的培养和鉴定
实验三 pcDNA3-HTcDNA重组质粒在猪动脉内皮细胞的表达
实验四 pcDNA3-HTcDNA重组质粒在猪肾细胞的表达
第二部分 转人HT基因猪动脉内皮细胞抗异种移植排斥功能试验
实验一 转人HT基因猪动脉内皮细胞抗人血清溶破试验
实验二 转人HT基因猪动脉内皮细胞活化抑制试验
第三部分 转人HT基因小鼠显微注射DNA片段的制备
结论
文献综述
综述Ⅰ 人类α1，2岩藻糖苷转移酶与异种移植排斥反应
综述Ⅱ 异种抗原及相关策略在异种移植的研究进展
综述Ⅲ 异种器官移植早期排斥及病理改变研究进展
综述Ⅳ 猪内源性逆转录病毒在异种移植的研究进展
附录
附录Ⅰ 英文缩略语
附录Ⅱ 在读期间发表的文献和参编的著作
附录Ⅲ 致谢
发布时间: 2005-09-13
参考文献
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