首页> 正文

HPV16主要衣壳蛋白L1与hnRNP H1的相互作用及其功能

2020-12-07阅读(601)

HPV16主要衣壳蛋白L1与hnRNP H1的相互作用及其功能

论文摘要

流行病学和相关研究证实人乳头瘤病毒（HPV）感染与尖锐湿疣、宮颈上皮瘤样增生和宫颈癌的发生关系密切。HPV感染机体后各种病毒基因的表达是受严格调控的,尤其是晚期基因,在未分化的细胞中几乎不表达,随着细胞分裂,病毒基因组随子细胞上移到表皮上层后,晚期蛋白的表达才被启动。这种分化依赖的晚期蛋白表达调控机制尚不明确。在以往的研究中发现,晚期蛋白在转录后水平受多种负调节元件的控制,其中早期多聚腺苷酸化信号（pAE）在晚期基因的转录后调控中起到核心的作用,它能使mRNA的转录提前终止,在HPV16 L2的N端有一个GU含量丰富的序列（GU-rich sequence,GRS）,是hnRNP H1蛋白结合位点,能够增强pAE的活性,进一步抑制晚期蛋白的表达。hnRNPH1在细胞中的分布水平有随着细胞的分化而降低的特点,晚期蛋白表达的组织特异性很可能与hnRNP H1的表达有关。我们用免疫共沉淀技术发现hnRNP H1与HPV16 L1蛋白有相互作用,并证实这种相互作用是天然状态下存在的。我们构建了一个模拟HPV转录调控的质粒模型（pGPG）,用两个GFP分别代替早期基因和晚期基因,中间加以pAE和下游的GRS序列。通过检测下游的GFP（G2）的RNA以及蛋白质的表达,来反映hnRNP H1蛋白及L1对晚期蛋白转录翻译的影响。在293F了细胞中转染pGPG质粒,几乎检测不到G2的转录产物,蛋白表达量也很低,沉默hnRNP H1基因后,G2的转录和表达量大大提高,印证了hnRNP H1对晚期蛋白的转录抑制效应起重要作用。我们首次发现:HPV16 L1的表达能够有效地提高G2的转录和蛋白表达水平,在HeLa和Huh7等细胞上也发现相同的现象,将hnRNP H1沉默后再转染HPV16 L1质粒,发现在没有H1的情况下,L1对G2的表达没有额外的刺激效应。提示HPV16 L1对晚期蛋白表达的提高可能是通过L1与hnRNPH1结合,抑制了hnRNP H1的功能来实现的。在病毒的感染过程中,L1蛋白很可能参与了晚期基因的转录后调控,对自身的表达有正协同的效应。L1与hnRNPH1相互阻遏,hnRNP H1表达过高时L1的表达被抑制,在分化的细胞中hnRNPH1的表达量降低,pAE活性不高,晚期基因可以通读、表达,随着L1蛋白表达量增多并结合到hnRNP H1上,hnRNP H1失活,最终L1蛋白得以大量表达,启动病毒成熟的后续过程。本文章为更进一步揭示HPV晚期蛋白的表达和病毒生活周期的调控规律提供了一些思路,为HPV引发的多种疾病的致病机理提供理论支持,并为相关治疗药物的研发提供有利的启示。

论文目录

  • 中文摘要
  • 英文摘要
  • 缩略词
  • 前言
  • 1.HPV概况
  • 1.1.HPV病理学研究
  • 1.2.HPV在不同年龄段人群中的易感性
  • 2.HPV基因组与结构
  • 2.1.HPV的基因组
  • 2.2 HPV病毒的结构
  • 3.HPV感染及增殖的分子生物学研究进展
  • 3.1.病毒与受体结合
  • 3.2.病毒的入胞与基因的运输
  • 3.3.HPV生活史
  • 4.HPV晚期基因转录后水平调控
  • 4.1 HPV蛋白表达调控的意义
  • 4.2.poly A signal
  • 4.3.3'-UTR
  • 5.hnRNP H1蛋白生物学功能及与HPV的关系
  • 5.1.hnRNP蛋白家族的主要功能
  • 5.2.hnRNP H1/H'与HPV蛋白表达调控的关系
  • 6.相关实验方法
  • 6.1.筛选相互作用蛋白的方法
  • 6.2.双向凝胶电泳
  • 6.3.基体辅助激光解吸电离飞行时间质谱
  • 6.4 RNA干扰技术
  • 7.本论文研究目的与意义
  • 材料与方法
  • 1.材料
  • 2.方法
  • 结果与分析
  • 第一部分:免疫沉淀法获取HPV16 VLPs结合蛋白方法的建立及初步验证
  • 1.免疫沉淀法获取HPV16 L1相互作用蛋白
  • 1.1.HPV VLPs的构建
  • 1.2.原核表达的HPV16 VLPs可以进入HeLa细胞
  • 1.3.免疫沉淀法获取及鉴定HPV 16L1相互作用的胞内蛋白
  • 1.4.MALDI-TOF-MS鉴定与HPV16 L1相互作用的蛋白
  • 2.hnRNP H1与HPV 16L1的相互作用验证
  • 2.1.hnRNP H1真核表达质粒的构建
  • 2.2.体内共沉淀验证HPV16 L1与H1蛋白的相互作用
  • 2.3.hnRNP H1与HPV16 L1在细胞内的共定位
  • 3.第一部分小结
  • 第二部分:hnRNP H1在病毒转录调控中的作用
  • 4.HPV16转录后调控模型的建立
  • 4.1.质粒的构建
  • 4.2.hnRNP H1参与的转录终止模型的验证
  • 5.HPV16 L1蛋白的表达对HPV转录模型的影响
  • 5.1.荧光显微镜及流式细胞技术检测GPG的表达受L1蛋白的影响
  • 5.2.RT-PCR检测16L1蛋白的表达对pGPG转录的影响
  • 5.3.Western blot检测16L1蛋白的表达对pGPG表达的影响
  • 5.4.HPV16 L1蛋白对pGPG转录产生的mRNA稳定性的影响
  • 5.5.hnRNP H1基因沉默后HPV16 L1对转录通读的影响
  • 6 第二部分小结
  • 讨论
  • 1.筛选相互作用蛋白方案
  • 2.2-DE和MALDI-TOF-MS分离鉴定蛋白
  • 3.蛋白相互作用的进一步验证
  • 4.hnRNP H1参与的HPV的晚期蛋白表达调控机制
  • 5.模拟HPV晚期基因转录后调控模型的建立
  • 6.L1蛋白对晚期基因表达的促进作用
  • 小结与展望
  • 参考文献
  • 致谢
  • 附录

    • 相关论文文献

    • [1].非小细胞肺癌患者癌组织、外周血中hnRNP A2/B1 mRNA的表达变化[J]. 山东医药 2012(34)
    • [2].hnRNP A2/B1 mRNA在非小细胞肺癌和转移淋巴结中表达及意义[J]. 中国病理生理杂志 2010(06)
    • [3].抗hnRNPA2／Bl多克隆抗体制备及其在非小细胞肺癌中的应用(英文)[J]. Chinese-German Journal of Clinical Oncology 2008(05)
    • [4].hnRNP L在肝癌中的表达及与巨噬细胞极化相关性研究[J]. 安徽医科大学学报 2019(10)
    • [5].沉默hnRNP A2/B1抑制人宫颈癌Hela细胞中cyclin D1/E表达的研究[J]. 重庆医学 2018(30)
    • [6].剪接因子对雌激素受体α7号外显子选择性剪接调控作用的研究[J]. 同济大学学报(医学版) 2014(06)
    • [7].HnRNP A/B蛋白D亚群的生物学功能[J]. 中国生物化学与分子生物学报 2012(11)
    • [8].沉默hnRNP A2/B1基因后通过Bcl-2/Bax影响宫颈癌CaSki细胞的凋亡[J]. 天津医药 2019(09)
    • [9].不均一性核糖核蛋白(hnRNP)在中枢神经系统中的作用[J]. 军事医学科学院院刊 2010(01)
    • [10].慢性粒细胞白血病细胞eIF4E mRNA表达及影响因素[J]. 第四军医大学学报 2008(18)
    • [11].hnRNP E1与HPV16及其早期蛋白E2在宫颈上皮内瘤样变中的相互关系研究[J]. 现代预防医学 2019(12)
    • [12].hnRNP K在肿瘤发病中作用的研究现状[J]. 华西医学 2008(05)
    • [13].hnRNP B1 mRNA在非小细胞肺癌患者外周血中手术前后的表达变化及临床意义(英文)[J]. Chinese-German Journal of Clinical Oncology 2012(02)
    • [14].探讨外周血hnRNP A2/B1诊断非小细胞肺癌的临床意义[J]. 实验与检验医学 2013(03)
    • [15].hnRNP K在肺癌组织中的表达[J]. 中国肺癌杂志 2008(02)
    • [16].非小细胞肺癌组织中hnRNP B_1和CD44的联合表达及其与预后的关系[J]. 四川大学学报(医学版) 2008(05)
    • [17].hnRNP B_1 siRNA对肺癌组织hnRNP B_1表达干扰效果的体内研究[J]. 四川大学学报(医学版) 2008(05)
    • [18].hnRNP K在肺腺癌中表达及其作用的研究[J]. 四川大学学报(医学版) 2008(05)
    • [19].hnRNP K shRNA对K562细胞效应的初步研究[J]. 重庆医科大学学报 2008(09)
    • [20].靶向hnRNP K基因siRNA的筛选及其对精原细胞存活的影响[J]. 信阳师范学院学报(自然科学版) 2017(04)
    • [21].hnRNP A2/B1在乳腺癌组织中表达水平及其凋亡调控的研究[J]. 贵州医药 2016(02)
    • [22].hnRNP E1对妊娠滋养细胞疾病恶变的早期预测价值评估[J]. 现代妇产科进展 2013(07)
    • [23].牦牛hnRNP K基因的克隆及序列分析[J]. 生物技术通报 2010(07)
    • [24].外周血和痰中hnRNP A2/B1检测对原发性肺癌的诊断价值[J]. 南昌大学学报(医学版) 2010(09)
    • [25].hnRNP A1的增强型绿色荧光标记及细胞应激定位分析[J]. 天津医药 2014(06)
    • [26].异质性胞核核糖核蛋白与肺癌发生发展的关系[J]. 广东医学 2016(10)
    • [27].人异质性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I)原核表达及初步应用[J]. 细胞与分子免疫学杂志 2009(12)
    • [28].山葵对肺癌组织hnRNP A_2/B_1表达的影响[J]. 中国呼吸与危重监护杂志 2008(02)
    • [29].抗人hnRNP A1单克隆抗体的制备及在颅咽管瘤组织中的应用[J]. 热带医学杂志 2008(03)
    • [30].hnRNP B_1 siRNA对肺腺癌细胞A549 p53表达的影响[J]. 四川大学学报(医学版) 2008(05)

    标签：;  ;  ;  

    HPV16主要衣壳蛋白L1与hnRNP H1的相互作用及其功能
    下载Doc文档

    猜你喜欢

    © 2024 毕速过 版权所有 鄂ICP备12018319号-5