TGF-β1介导的Rho/ROCK信号通路对HK-2细胞紧密连接的影响

论文摘要

目的探讨TGF-β1介导的Rho/ROCK信号通路对HK-2细胞紧密连接的影响。方法（1）用TGF-β1 （5ng/ml）刺激人肾小管上皮细胞（HK-2）,采用Western Blot法观察0、15min、30min、1h、4h、12h的总RhoA及活化RhoA蛋白表达,采用Real time PCR、Western Blot及间接免疫荧光法分别观察0、12h、24h、48h的紧密连接蛋白Occludin和ZO-1mRNA及蛋白表达。（2）将HK-2细胞分成正常对照组、TGF-β1 （5ng/ml）刺激组和TGF-β1刺激（5ng/ml）+Y-27632（10μM）干预组分别干预48h,采用Real time PCR、Western Blot及间接免疫荧光法分别观察Occludin和ZO-1的mRNA及蛋白表达。结果（1）经TGF-β1刺激后,HK-2细胞总RhoA蛋白表达无明显改变；活化RhoA于15分钟即出现活性升高,1小时达高峰,4h开始减弱,12h仍高于0时间点,与0时间点比较分别为（2.82±0.57）倍、（4.06±0.54）倍、（3.44±0.31）倍、（3.01±0.44）倍,P值均小于0.05。（2）经TGF-p1刺激后,Real time PCR显示Occludin和ZO-1mRNA表达均呈时间依赖性降低,其中24h、48h P<0.05。Western Blot及间接免疫荧光法均显示Occludin和ZO-1蛋白表达均呈时间依赖性降低,其中24h、48h P<0.05。（3）经ROCK特异性抑制剂Y-27632干预后,Real time PCR显示Occludin和ZO-1mRNA表达较TGF-β1刺激组明显升高（P<0.05）,Western Blot及间接免疫荧光法均显示Occludin和ZO-1蛋白表达水平较TGF-β1刺激组明显升高（P<0.05）。结论（1）TGF-β1能诱导HK-2细胞Rho/ROCK信号通路活化。（2） TGF-β1介导的Rho/ROCK信号通路可通过下调HK-2细胞紧密连接蛋白表达促进EMT。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 英文缩略词表
• 第一章 前言
• 第二章 材料与方法
• 2.1 材料
• 2.2 方法
• 2.3 统计学处理
• 第三章 实验结果
• 3.1 TGF-β1诱导HK-2细胞一般形态学的改变
• 3.2 TGF-β1诱导HK-2细胞RhoA活化
• 3.3 TGF-β1对HK-2细胞紧密连接蛋白Occludin及ZO-1表达的影响
• 3.4 Y-27632对TGF-β1诱导的HK-2细胞紧密连接蛋白Occludin及ZO-1表达的影响
• 第四章 讨论
• 第五章 结论
• 参考文献
• 综述
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间主要研究成果