大豆肽的制备及其体内外抗氧化活性研究

论文摘要

自由基医学基础研究表明氧自由基引起的疾病已超过百种,有资料显示许多慢性疾病及衰老现象均和人体内的自由基水平失衡有关,过量的自由基对机体产生氧化性损伤,当这种损伤不能及时修复并且积累到一定程度时往往导致疾病的出现。外源性抗氧化剂可以帮助人们维持体内自由基的平衡。通过对具有抗氧化性的天然食物进行研究、筛选和改性,有可能开发出非常有效的抗氧化药物和保健食品。大豆肽是大豆蛋白经酶水解获得的短肽混合物,目前已发现大豆肽具有抗氧化、降血压、降胆固醇、降血糖、抗疲劳等生理活性,其中抗氧化性是大豆肽其它生理功能的基础。通过筛选、分离抗氧化大豆肽有可能从中发现治疗自由基引发疾病的药物或保健食品。本论文首先通过单因素实验结合响应面分析对大豆抗氧化活性肽的酶解工艺进行优化研究,确定了酶解的最佳工艺条件为:底物浓度8.50%、加酶量8 750 U/g底物、pH11、温度55℃、时间3.0 h,该条件下得到羟自由基清除率为65.37%的大豆肽。采用凝胶过滤层析对豆粕粉酶解物进行分离得到了多肽的3个组分,其中FⅡ组分具有最强的抗氧化活性,对FⅡ进行制备,进一步进行体外、体内抗氧化实验。体外实验结果表明,大豆肽能够清除Fenton反应产生的羟自由基,能清除邻苯三酚系统产生的超氧阴离子自由基,并能显著地抑制H2O2诱导的红细胞溶血。大豆肽对于脂质过氧化反应的终产物MDA的实验表明,大豆肽粗品和FⅡ体外可显著降低肝匀浆的自氧化与诱导氧化所产生的MDA。用烘箱加速氧化法,通过测定油脂的POV值探讨了在保温条件下大豆肽对大豆油、菜籽油氧化的抑制效果,结果显示大豆肽对两种油脂的脂质过氧化均有一定的抑制作用。用D-半乳糖建立小鼠衰老模型,给予不同浓度的大豆肽,考察了实验小鼠脑指数、心指数、肝指数、脾指数、肾指数变化,测定小鼠血清中MDA的含量,SOD的活力;测定小鼠脑、肝组织中MDA的含量,SOD、GSH-Px、CAT的活力。实验结果表明大豆肽:（1）对小鼠脾指数有显著影响;（2）可提高衰老小鼠血清中SOD活力降低MDA含量;（3）降低衰老小鼠肝、脑组织MDA含量;（4）提高肝、脑组织SOD活力、GSH-Px、CAT活力。

论文目录

• 摘要
• Abstract
• 第一章 绪论
• 1.1 大豆肽的理化性质
• 1.1.1 良好的溶解性及在高浓度状态下的低粘度
• 1.1.2 良好的耐酸及耐热的稳定性
• 1.1.3 良好的吸湿性和保湿性
• 1.1.4 改善蛋白质的起泡性
• 1.1.5 使凝胶软化功能
• 1.1.6 促进发酵作用
• 1.2 大豆肽的营养价值及生理功能
• 1.2.1 易消化和吸收性
• 1.2.2 增强运动员体能的效果
• 1.2.3 促进脂肪代谢效果
• 1.2.4 大豆肽的降血压作用
• 1.2.5 抑制胆固醇的作用
• 1.2.6 大豆肽的抗氧化性
• 1.2.7 低抗原性
• 1.2.8 降低血糖
• 1.2.9 增加骨密度，预防骨质疏松
• 1.2.10 其它功能特性
• 1.3 抗氧化肽活性的研究方法
• 1.3.1 氧化物的还原体系
• 1.3.2 自由基体系
• 1.3.3 脂质过氧化体系
• 1.3.4 体内抗氧化实验
• 1.4 立题背景和研究意义
• 1.5 本研究的主要内容
• 第二章 酶解豆粕粉制备抗氧化肽的研究
• 2.1 引言
• 2.2 材料与仪器
• 2.2.1 实验材料
• 2.2.2 主要仪器
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 酶法制备大豆肽
• 2.3.2 脱脂豆粕的酶解工艺
• 2.3.3 水解度（DH）测定：pH-Stat 法
• 2.3.4 蛋白酶活力测定
• 2.3.5 大豆肽体外抗氧化活性测定方法
• 2.3.6 脱脂豆粕蛋白质含量的测定
• 2.4 结果与讨论
• 2.4.1 单酶酶解效果对比
• 2.4.2 单因素实验
• 2.5 酶解工艺参数的优化
• 2.6 本章小结
• 第三章 大豆肽的G-25 凝胶分离及其体外抗氧化活性研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料与仪器
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 主要仪器
• 3.2.3 动物样品的制备
• 3.3 实验方法
• 3.3.1 大豆肽的制备
• 3.3.2 G-25 色谱条件
• 3.3.3 相对分子质量分布范围测定
• 3.3.4 大豆肽体外清除羟自由基（·OH-）的测定
• 2^-的测定'>3.3.5 大豆肽体外清除·O₂^-的测定
• 2O₂ 所致溶血的影响'>3.3.6 大豆肽对小鼠红细胞 H₂O₂所致溶血的影响
• 3.3.7 大豆肽对小鼠肝匀浆氧化的影响
• 3.3.8 过氧化值（POV）测定方法
• 3.3.9 大豆肽在豆油中抗氧化活性的研究
• 3.3.10 大豆肽在菜籽油中抗氧化活性的研究
• 3.3.11 数据处理
• 3.4 结果与讨论
• 3.4.1 大豆肽G-25 分离结果
• -和·O₂^-效果比较'>3.4.2 豆粕粉和大豆肽粗品清除·OH^-和·O₂^-效果比较
• -的效果'>3.4.3 大豆肽粗品和FII 清除·OH^-的效果
• 2^-的效果'>3.4.4 大豆肽粗品和FII 清除·O₂^-的效果
• 2O₂所致溶血的影响'>3.4.5 大豆肽粗品和F Π对小鼠红细胞H₂O₂所致溶血的影响
• 3.4.6 大豆肽粗品和F Π对小鼠肝匀浆氧化的影响
• 3.4.7 大豆肽对油脂的抗氧化效果
• 3.5 本章小结
• 第四章 大豆肽体内抗氧化活性研究
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料和仪器
• 4.2.1 实验材料
• 4.2.2 实验试剂
• 4.2.3 实验仪器
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 昆明种小鼠亚急性衰老模型的建立
• 4.3.2 实验小鼠给药
• 4.3.3 实验小鼠的处理及相关检测方法
• 4.4 实验结果
• 4.4.1 大豆肽对半乳糖模型小鼠器官指数的影响
• 4.4.2 大豆肽对小鼠脑组织MDA、SOD、GSH-Px、CAT 活力的影响
• 4.4.3 大豆肽对小鼠肝组织MDA、SOD、GSH-Px、CAT 活力的影响
• 4.4.4 大豆肽对小鼠血清MDA、SOD 活力的影响
• 4.5 讨论
• 4.5.1 小鼠生存情况
• 4.5.2 大豆肽对小鼠各器官指数的影响
• 4.5.3 大豆肽对小鼠肝、脑组织、血清中MDA、SOD 的影响
• 4.5.4 大豆肽对小鼠肝、脑组织、血清中CAT 活力的影响
• 4.5.5 大豆肽对小鼠肝、脑组织、血清中GSH-Px 活力的影响
• 4.6 本章小结
• 致谢
• 参考文献
• 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文