暴露亚中毒阈剂量毒死蜱对新生鼠中脑黑质多巴胺能神经元线粒体的影响

暴露亚中毒阈剂量毒死蜱对新生鼠中脑黑质多巴胺能神经元线粒体的影响

论文摘要

本课题组前期研究发现,新生SD大鼠暴露亚中毒阈剂量毒死蜱后,小胶质细胞被激活,并持续到SD大鼠青春期,且在青春期和成年期多巴胺能神经元受损伤。已有多项研究表明小胶质细胞的激活可能介导或参与了多巴胺能神经元的损伤。以上研究提示我们,暴露亚中毒阈剂量毒死蜱的SD大鼠在其新生期已经存在多巴胺能神经元损伤的潜在因素。课题组前期研究还发现新生SD大鼠暴露亚中毒阈剂量毒死蜱,脑匀浆超氧化物岐化酶含量减少,丙二醛含量及脑蛋白羰基表达增高,提示脑组织氧化应激可能参与了毒死蜱神经毒作用。氧化应激是由于机体高活性分子如氧自由基(reactive oxygen species,ROS)等产生过多、超过了机体清除能力而产生。而ROS的产生主要来源于线粒体,当线粒体损伤时,ROS产生增多,同时线粒体本身又是ROS氧化损伤的靶点,如此可形成线粒体损伤的恶性循环。所以,本课题在以上研究的基础上提出假设,亚中毒闽剂量毒死蜱可致新生SD大鼠中脑黑质多巴胺神经元线粒体损伤。目的:探讨新生SD大鼠暴露亚中毒阈剂量毒死蜱(Chlorpyrifos,CPF)对中脑黑质多巴胺神经元线粒体的影响方法:新生11-14天SD大鼠85只,随机分组为毒死蜱组(CPF组,n=29)和对照组(n=56)。对照组又分为溶剂二甲亚砜对照组(DMSO组,n=29)和生理盐水对照组(NS组,n=27)。按照课题组前期方法建立新生SD大鼠暴露亚中毒阈剂量毒死蜱的动物模型。动物在注药完毕后24h、72h、6d处死。①用免疫组化法和Western Blotting法检测中脑黑质线粒体呼吸链复合体Ⅰ亚基1(NADH dehydrogenase subunit 1, ND1);②免疫组化法检测中脑黑质细胞色素C (CytochromeC, CytC);③在72h随机取毒死蜱组、二甲亚砜对照组中脑黑质用醋酸铀、硝酸铅双重染色法电镜观察线粒体超微结构变化;④在72h随机取毒死蜱组、二甲亚砜对照组中脑黑质用免疫组化染色后透射电镜下观察染色酪氨酸羟化酶(Tyrosine Hydroxylase, TH)阳性细胞线粒体超微结构变化。所有数据用均值±标准差(x±S)表示,所有资料采用SPSS18.0统计软件包进行数据处理。结果:1.线粒体呼吸链复合体Ⅰ亚基1即ND1表达有变化,毒死蜱组和对照组比较,表达明显增多,差异有统计学意义(P<0.05);毒死蜱组各时间点表达无明显差异,差异无统计学意义(P>0.05)。2.线粒体呼吸链Cyt C表达有变化,毒死蜱组与对照组在72h、6d时间点上比较,表达增多,差异有统计学意义(P<0.05);实验组表达随着各时间点的递增而递增,呈时间依赖性,差异有统计学意义(P<0.05)。3.醋酸铀、硝酸铅双重染色法电镜下可见毒死蜱组多巴胺能神经元水肿,胞质内容稀少,其内线粒体少见并水肿,有空泡形成;而二甲亚砜对照组多巴胺能神经元无水肿,胞质内容丰富,其内线粒体较多,形态基本正常,呈杆状和粒状,无水肿及空泡形成。4.TH免疫组织化学染色后电镜下可见毒死蜱组阳性细胞(即多巴胺能神经元)内线粒体明显水肿,有大量空泡形成,数量较少;而二甲亚砜对照组线粒体形态基本正常,无水肿及空泡形成,数量较多。结论:1.亚中毒阈剂量毒死蜱可致新生SD大鼠中脑黑质呼吸链复合体Ⅰ亚基1与细胞色素C表达增加。2.亚中毒阈剂量毒死蜱可致新生SD大鼠中脑黑质多巴胺能神经元内线粒体水肿,有空泡形成,数量减少。3.线粒体结构与功能受损是毒死蜱产生神经发育毒性作用的可能机制之一

论文目录

  • 摘要
  • ABSTRACT
  • 中英文对照缩略词表
  • 前言
  • 第一章 材料与方法
  • 1.1 材料
  • 1.1.1 实验动物
  • 1.1.2 动物分组和模型制作
  • 1.1.3 主要仪器和试剂
  • 1.2 实验方法
  • 1.2.1 免疫组织化学学检测ND1和细胞色素C表达
  • 1.2.2 Western Blotting检测ND1表达
  • 1.2.3 电镜观察中脑黑质部位线粒体超微结构
  • 1.3 数据处理和统计学分析
  • 第二章 结果
  • 2.1 新生SD大鼠暴露亚中毒阈剂量毒死蜱一般情况观察
  • 2.2 亚中毒阈剂量毒死蜱对新生SD大鼠脑黑质NDl蛋白表达的影响
  • 2.2.1 免疫组织化学法检测ND1蛋白表达
  • 2.2.2 Western Blotting检测ND1蛋白表达
  • 2.3 亚中毒阈剂量毒死蜱对新生SD鼠脑黑质Cyt C表达的影响
  • 2.4 亚中毒阈剂量毒死蜱对新生SD大鼠中脑多巴胺神经元线粒体超微结构的影响
  • 2.4.1 醋酸铀、硝酸铅双重染色电镜观察
  • 2.4.2 免疫组织化学染色电镜观察
  • 第三章 讨论
  • 3.1 亚中毒阈剂量毒死蜱致新生鼠脑多巴胺神经元线粒体超微结构改变
  • 3.2 亚中毒阈剂量毒死蜱致新生鼠中脑黑质线粒体功能改变
  • 3.2.1 亚中毒剂量毒死蜱诱导新生鼠中脑黑质线粒体复合体Ⅰ亚基ND表达水平改变
  • 3.2.2 亚中毒剂量毒死蜱致新生鼠脑Cyt C表达水平改变
  • 3.3 小结
  • 第四章 结论
  • 参考文献
  • 附图
  • 综述
  • 参考文献
  • 致谢
  • 攻读学位期间主要成果
  • 相关论文文献

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