表达登革病毒非结构蛋白的重组痘苗病毒的构建和表达

论文题目: 表达登革病毒非结构蛋白的重组痘苗病毒的构建和表达

论文类型: 硕士论文

论文专业: 病原生物学

作者: 张军霞

导师: 唐建蓉

关键词: 登革病毒,痘苗病毒,非结构蛋白,重组体,保护性免疫

文献来源: 中国药品生物制品检定所

发表年度: 2005

论文摘要: 登革病毒为黄病毒属的主要成员，是一类有包膜的单股正链RNA病毒。自然界存在的登革病毒有四个血清型，每型均可使人发病，症状从较轻微的DF，到较严重的DHF／DSS．自二十世纪中叶以来，登革病毒的传播已成为热带和亚热带地区严重的公共卫生问题，随着全球变暖和国际交往的日益频繁，DF／DHF发病率迅速上升，每年约有1亿人感染，威胁着世界上近三分之一人口的健康，对此WHO、有关国家防疫部门及病毒学家始终予以高度重视。但目前仍无安全有效的疫苗批准上市。疫苗研究的起始阶段着重于传统的减毒活疫苗和灭活疫苗，但多年的临床试验数据表明，其四价疫苗不足以同时提供针对四个血清型的保护性免疫应答。近年，许多病毒学家致力于用能引起长期免疫保护反应的病毒亚单位抗原做疫苗。为避免ADE，人们将研究焦点从最初的E蛋白转向非结构蛋白，主要是NS1。近年多采用真核表达系统如杆状病毒和痘苗病毒等作为亚单位疫苗的载体，自上世纪80年代以来，痘病毒真核表达载体己大量用于构建JEV、HIV、流感、乙型肝炎和HSV等的疫苗候选株。对NS1蛋白的抗原性和保护性研究的很多，已试验动物证明能保护动物免受致死剂量病毒的攻击，针对NS3蛋白近年研究也日益增多，因为该蛋白有很好的免疫原性，有多个T细胞识别位点，尽管就其细胞免疫所产生的免疫保护作用在国内外的研究都很少。基于以上资料，本研究将登革病毒的NS1和NS3分别重组到痘病毒载体上，通过痘病毒复制，稳定的表达有活性的目的蛋白，将重组活病毒进行动物试验，检测其抗体滴度，并做致死剂量病毒攻击，初步探索NS1／NS3的免疫保护性。首先，分别构建了含登革2和登革4的NS1、NS3的重组质粒NS1／NS3—pGS20。利用Trizol试剂从感染DEN2和DEN4的乳鼠脑中提取病毒RNA，然后分别进行RT—PCR，得到DEN2和DEN4的NS1、NS3基因。先后分别插入克隆载体pMD18—T中测序检查序列的正确性，再通过目的片断和穿梭载体上

论文目录:

缩略语索引

中文摘要

ABSTRACT

前言

第一部分表达登革病毒2型NS1、NS3蛋白和登革病毒4型NS1蛋白的重组痘苗病毒的构建

实验材料与方法

实验结果

1. 目的基因的扩增与测序

2. 转移质粒的构建及鉴定

3. 重组痘苗病毒的构建及鉴定

4. 重组痘苗病毒的动物评价

讨论

第二部分 DEN2-NS3蛋白的原核表达及其抗血清的制备

一实验材料

二实验方法

三实验结果

1. DEN2-NS3基因片断的克隆

2. 表达载体pET-30a/D2N3的构建

3. DEN2-NS3蛋白小量表达分析和表达条件的优化

4. DEN2-NS3蛋白大量表达后的纯化结果

5. 体液免疫检测

6. 细胞免疫检测

讨论

第三部分抗DEN2和DEN4的多克隆腹水抗体的制备

一、实验材料

二、实验方法

三、实验结果

讨论

小结

参考文献

综述

附录

致谢

发布时间: 2007-03-20

参考文献

[1].白纹伊蚊抗溴氰菊酯品系的建立及其对登革病毒易感性的研究[D]. 贾志荣.南方医科大学2017
[2].MERS-CoV S重组痘苗病毒免疫原性评价及血清抗体检测方法初步探索[D]. 王平兴.中国疾病预防控制中心2015
[3].Ⅲ型登革病毒NS1蛋白特异性单克隆抗体的制备、鉴定及方法学建立[D]. 晋晶.南方医科大学2008
[4].EBV-LMP2重组痘苗病毒免疫效果研究[D]. 张丽霞.北京工业大学2014
[5].2014年深圳市1型登革病毒流行株的分子溯源及全基因组序列分析[D]. 马珍元.南方医科大学2016
[6].哺乳动物上皮细胞中鞘糖脂在登革病毒感染中的作用[D]. 王娟娟.苏州大学2015
[7].登革2型病毒非结构蛋白NS2B的表达、纯化及其抗体制备[D]. 刘丽梅.第三军医大学2008
[8].登革3型病毒感染人脑微血管内皮细胞的机制研究[D]. 周旋.南方医科大学2014
[9].应用哺乳动物细胞表面抗体展示技术构建登革病毒特异性全长人源抗体库[D]. 温扬明.南方医科大学2013
[10].人鼻病毒非结构蛋白2B激活PERK-eIF2α信号通路引起内质网应激的机制研究[D]. 迟苗苗.中国疾病预防控制中心2015

表达登革病毒非结构蛋白的重组痘苗病毒的构建和表达

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