丹皮酚及氧化苦参碱对RBL-2H3细胞活化脱颗粒的影响

论文摘要

目的:通过建立体外抑制MC脱颗粒的药效学模型,从MC的角度探讨Pae及Oxy的抗Ⅰ型变态反应作用机制。 方法:一,用MTT比色法检测不同浓度的Pae和Oxy对RBL-2H3细胞活化的影响,并求出IC50值。二,建立体外抑制RBL-2H3细胞脱颗粒的药效学模型。取对数生长的RBL-2H3细胞,以C48/80刺激细胞活化脱颗粒,分别检测0min、5min、15min、30min、1h分泌组胺的量和0min、5min、15min、30min、1h、2h、4h、8h、16h、24h分泌TNF-α的量。三,根据MTT比色法分别选择Pae和Oxy 5个不同的实验浓度,并以色甘酸钠作为阳性对照。以C48/80刺激RBL-2H3细胞活化脱颗粒,测不同浓度药物对RBL-2H3细胞分泌组胺及TNF-α变化。 结果:一,Pae在浓度（mg/ml）为0.025、0.05、0.1、0.2、0.4时,对RBL-2H3细胞的增值抑制率（%）各为13.52、19.64、36.22、52.04、123.47,IC50值为0.2200mg/ml;Oxy为0.2mg/ml、0.4mg/ml、0.8mg/ml、1.6mg/ml、3.2mg/ml时,对RBL-2H3细胞的增值抑制率（%）各为-4.76、32.70、38.41、50.79、60.40,IC50值为0.9454mg/ml。二,C48/80 10μg/ml刺激RBL-2H3细胞活化脱颗粒,分泌组胺的释放率（%）分别为:0min为6.54±0.72、5min为12.17±1.42、15min为17.34±0.86、30min为23.14±1.01、60min为26.24±2.23:不同时间分泌TNF-α的量（pg/ml）分别为:0min为20.98±1.27、5min为32.92±3.46、为15min为37.15±2.97、30min为36.58±5.25、1h为67.65±5.33、2h为47.63±15.52、4h为14.22±6.14、6h为23.32±2.83、8h为8.08±2.69、24h为8.84±0.57。三,根据RBL-2H3细胞活化脱颗粒,分泌组胺及TNF-α动力学变化,可推测,RBL-2H3细胞活化脱颗粒分泌组胺的高峰大约在30min,分泌TNF-α大约在1h。因此,选择30min检测RBL-2H3细胞活化脱颗粒组胺的分泌的量,选择60min检测RBL-2H3细胞活化脱颗粒TNF-α的分泌的量。根据MTT比色法选择Pae和Oxy5个不同的实验浓度分别为:Pae的5个浓度（mg/ml）为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5,Oxy 5个浓度（mg/ml）为100、10-1、10-2、10-3、10-4。以色甘酸钠（0.1mg/ml、0.5mg/ml）为对照。各种不同浓度的药物先与细胞预培养60min后,加入C48/8010μg/ml刺激RBL-2H3细胞活化。结果Pae的5个浓度对RBL-2H3细胞活化脱颗粒组胺的释放抑制率（%）各为:色甘酸钠0.1mg/ml为36.55±1.78、0.5mg/ml为55.01±1.18,Pae 10-1mg/ml为73.93±1.67、10-2mg/ml为57.55±3.18、10-3mg/ml为35.18±3.65、10-4mg/ml为15.01±1.67、10-5mg/ml为6.68±2.94。Oxy 100mg/ml为67.76±2.93、10-1mg/ml为42.47±2.77、10-2mg/ml为33.49±2.85、10-3mg/ml为18.35±1.07、10-4mg/ml为9.09±2.79。Pae 10-1mg/ml、10-2mg/ml抑制RBL-2H3细胞释放组胺作用较色甘酸钠0.1mg/ml强（P<0.05）,10-3mg/ml抑制RBL-2H3细胞释放组胺作用和色甘酸钠0.1mg/ml相—一一一一塑些鱼鲤鹦兰丝鱼生一—（P>0.05）,10一‘mg/ml抑制RBL一2H3细胞释放组胺作用较色甘酸钠0.smg/ml（P<0.05）,10一Zmg/m1抑制RBL一2H3细胞释放组胺作用和色甘酸钠0.lmg/m1相当（P>0.05）。oxy loomg/ml、甘酸钠0.lmg/ml强（P<0.05）,甘酸钠0.lmg/ml相当（P）0.05),10一‘mg/m1抑制RBL一2H3细胞释放组胺作用较色10一、g/ml抑制RBL一2H3细胞释放组胺作用和色当强100mg/ml抑制RBL一2H3细胞释放组胺作用较色甘酸钠0.smg/ml强（P<0.05）。Pae及Oxy其余各浓度较色甘酸钠0.lmg加1、0.smg/m1抑制RBL一2H3细胞释放组胺作用弱（P<0.05）。经相关与回归分析,Pae浓度的对数与RBL一2H3细胞释放组胺抑制率呈线性关系,库之逊相关系数 (Pearson*（一lgX）（线性关系,eorrelation）为一0.991（P=0.000（0.01）,回归方程为Y=0.908一0.177P== 0.001<0 .01）。oxy浓度的对数与RBL一2H3细胞释放组胺抑制率呈皮尔逊相关系数（Pearson Correlation）为一0.992(P== 0.000（0.01）,回归方程为仁0 .645一0.146*（一zgx）（P=0.001<0.01）。对RBL一2H3粒TNF一Q的分泌的抑制率（%）各为:色甘酸钠0.lmg/m1为细胞活化脱颗35.33士0.07、0 .smg/ml.17士0.4 .8士0.为4 1 .48士0.03,Pae 10一‘mg/ml为86.54士0.01、1003、10一3mg/ml为50.92士0.04、一0一‘mg/fnl为27.33士0.04一’mg/ml为、10一smg/爪104,oxy IO0mg/ml为77.64土0.02、一o一‘mg/ml为73.50士0.02、10一,67为mg/Inl为53·04士o·02·10一3mg/ml为25·73士O·03、10一‘mg/ml为o·18士o·04:Paelo一‘mg/m1、10一Zlng/m1、10一3Ing/m1抑制RBL一2H3细胞释放TNF一。作用牧笆甘酸钠0.lmg/ml、0.smg/ml强(P（0.05）。Oxy 10Omg/ml、10一’mg/ml、10一,mg/ml抑制RBL一2H3细胞释放TNF一a作用强于色甘酸钠0.lmg/ml、0.smg/ml(P（0.05）。Pae及Oxy其余各浓度较色甘酸钠0 .lmg/ml、0.5鲍/耐抑制RBL一2H3细胞释放TNF一。作用弱（P<0·05）o经相关于回归分析,Pae浓度的对数与RBL一2H3.细胞释放TNF一Q抑制率呈线性关系 皮尔逊相关系数（PearS。n Correlation）为一0.998(P=0.000（0.01）,并得出回归方程为水1 .053一0.2303*（一lgx）（P=0.00一<0.01）。Oxy浓度的

论文目录

• 中文摘要
• 英文摘要
• 前言
• 材料和方法
• 1 材料
• 2 方法
• 2.1 MTT法测定丹皮酚和氧化苦参碱对RBL-2H3细胞活性的影响实
• 2.2 RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放组胺及TNF-α的动力学实验
• 2.3 丹皮酚和氧化苦参碱对RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放组胺及TNF-α影响实验
• 2.4 检测组胺及TNF-α实验
• 结果
• 1 MTT法测定丹皮酚和氧化苦参碱对RBL-2H3细胞活性的影响实验结果
• 2 RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放组胺及TNF-α的动力学实验结果
• 2.1 组胺和TNF-α标准品与吸光值标准曲线实验结果
• 2.2 RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放组胺的动力学实验结果
• 2.3 RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放TNF-α的动力学实验结果
• 3 丹皮酚和氧化苦参碱对RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放组胺及TNF-α影响实验结果
• 3.1 丹皮酚和氧化苦参碱对RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放组胺及影响实验结果
• 3.2 丹皮酚和氧化苦参碱对RBL-2H3细胞活化脱颗粒释放TNF-α影响实验结果
• 讨论
• 结语
• 参考文献
• 文献综述
• 致谢