重组人载脂蛋白CⅢ在毕赤酵母中表达的研究

论文摘要

人载脂蛋白CⅢ（apoprotein-CⅢ,ApoCⅢ）是一种水溶性低分子量蛋白质,是载脂蛋白C族中含量最丰富的一类。由于ApoCⅢ在血脂代谢中的重要作用,目前对于关于它的研究越来越受到重视。本研究利用RT-PCR技术从肝组织中克隆了人apoCⅢcDNA全长序列,并以其为模板扩增出两端引入限制性内切酶位点的apoCⅢ编码序列,将其连接到经本室改造的表达载体pPICZα,并将其电转染进入毕赤酵母中。结果表明,本研究正确克隆了apoCⅢcDNA序列,在此基础上构建的重组人ApoCⅢ毕赤酵母真核表达体系经甲醇诱导可分泌ApoCⅢ蛋白。

论文目录

• 提要
• 英文缩略词表
• 第一章 前言
• 一、引言
• 二、apoCⅢ的基因结构
• 三、ApoCⅢ的蛋白结构
• 四、ApoCⅢ与血浆脂质代谢
• （一） ApoCⅢ抑制脂蛋白脂酶活性
• （二） ApoCⅢ抑制肝脏摄取TRL 及其残粒
• （三） 参与调节卵磷脂胆固醇酰基转移酶和胆固醇酯转移蛋白的活性
• （四） 转人apoCⅢ基因小鼠模型与相关疾病的研究
• 五、apoCⅢ基因多态性
• 六、酵母表达系统的优点
• 七、立题依据
• 第二章 人 ApoCⅢ克隆载体的构建
• 一、材料
• （一） 器材及设备
• （二） 主要试剂
• 二、方法
• （一） Trizol 法从人肝组织中提取总RNA
• （二） RT-PCR 扩增cDNA 序列
• （三） 人apoCⅢ基因克隆载体的构建
• 三、结果
• 四、讨论
• 第三章 重组人ApoCⅢ在毕赤酵母中的表达
• 一、材料
• （一） 器材、设备
• （二） 主要试剂及配制
• （三） 质粒和菌株
• 二、方法
• （一） 重组ApoCⅢ表达载体的构建
• （二） 毕赤酵母的转化
• （三） 转化阳性菌株的筛选及诱导表达
• （四） SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）
• 三、结果
• 四、讨论
• 第四章 研究总结
• 1. 本研究中得出的结论
• 2. 本研究的创新之处
• 参考文献
• 中文摘要
• 英文摘要
• 致谢