整合素β1对人滋养层细胞粘附的影响

论文摘要

在人胎盘发育过程中,滋养层细胞对子宫内膜血管的入侵至关重要。滋养层细胞的整个入侵过程是先进入毛细血管、再迁移至子宫螺旋动脉并在此过程中对子宫动脉血管系统进行重构。这一迁移过程提示,滋养层细胞的迁移方向是与血液的流动方向相反的,即滋养层细胞是逆血流而上的。为了弄清滋养层细胞在妊娠过程中的生理作用以及入侵子宫脉管系统的机理,学术界已做了大量卓有成效的工作,但是关于滋养层细胞在血管系统中逆流迁移机制的研究却极其有限。因此,为了深入了解和认识体内滋养层细胞逆血流迁移行为和调节机制,本文从细胞粘附分子的角度分析了滋养层细胞β1整合素的表达与其迁移行为的相关性。本论文的具体研究工作和结果、结论如下:首先,本文建立了一种简单稳定的人体滋养层细胞原代培养方法。结果表明:采用胰酶+DNA酶辅助消化的方法可显著提高原代培养滋养层细胞的产量;同时,通过Percoll非连续梯度离心以及相应的差速贴壁和机械刮除等纯化步骤后得到的滋养层细胞纯度相对较高,可达95 %以上,且细胞形态单一,生长稳定,细胞活力强。这说明本文采用的方法适合滋养层细胞的分离、纯化和体外培养。其次,本文还采用微管吸吮技术对滋养层细胞的粘附力学特性进行了研究。结果表明:滋养层细胞的粘附力随I型鼠尾胶原浓度的增加而呈显著的线性增加趋势,表现出明显的浓度依赖关系。当与内皮细胞接触时,滋养层细胞表现出较高的粘附力,表明与内皮细胞的接触可显著增强滋养层细胞的粘附力学行为。此外,本文还从粘附分子的角度对滋养层细胞与胶原和内皮细胞的粘附力学特征进行了分析,结果提示在滋养层细胞的粘附过程中,β1整合素也起着重要的调节作用。最后,本文研究了体内绒毛组织和体外培养的滋养层细胞整合素表达的特性。结果表明:β1整合素在迁移显型滋养层细胞上高度表达。在剪切应力作用下,滋养层细胞β1整合素的表达随剪切应力作用的时间的延续而显著变化,剪切应力增强了滋养层细胞β1整合素的表达。当滋养层细胞与内皮细胞共培养时,β1整合素的表达较单独培养时显著增强。这些结果提示,β1整合素在滋养层细胞对内皮细胞的粘附和迁移过程中有着重要的关系。本文的研究结果可进一步揭示人滋养层细胞生长、侵袭、迁移过程与滋养层细胞力学特性的相关关系,为全面认识人滋养层细胞入侵子宫脉管系统的机理提供定量的参考依据。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 1 绪论
• 1.1 引言
• 1.2 滋养层细胞的侵袭过程研究
• 1.3 滋养层细胞的侵袭调控机制研究
• 1.3.1 整合素对滋养层细胞粘附和迁移的影响
• 1.3.2 MMPs/TIMPs 对滋养层细胞粘附和迁移的影响
• 1.3.3 其他因素对滋养层细胞粘附和迁移的影响
• 1.4 问题的提出及研究意义
• 1.5 研究目的和研究内容
• 2 胚胎绒毛滋养层细胞的培养及鉴定
• 2.1 引言
• 2.2 实验材料
• 2.2.1 标本来源
• 2.2.2 主要实验设备及器材
• 2.2.3 主要试剂
• 2.2.4 常用试剂配制方法
• 2.3 实验方法
• 2.3.1 人体胚胎绒毛滋养层细胞的原代培养
• 2.3.2 胚胎绒毛滋养层细胞的纯化
• 2.3.3 胚胎绒毛滋养层细胞的传代培养
• 2.3.4 滋养层细胞的免疫细胞化学鉴定
• 2.4 实验结果
• 2.4.1 绒毛滋养层细胞的原代培养
• 2.4.2 胚胎绒毛滋养层细胞的免疫细胞化学鉴定
• 2.5 讨论
• 3 胚胎绒毛滋养层细胞的粘附力学特性研究
• 3.1 引言
• 3.2 实验材料与方法
• 3.2.1 实验材料
• 3.2.2 微管吸吮测量系统及细胞粘附力的计算
• 3.2.3 实验方法
• 3.3 结果
• 3.3.1 滋养层细胞粘附力与Ｉ型鼠尾胶原的浓度依赖性
• 3.3.2 滋养层细胞粘附力与Ｉ型鼠尾胶原作用的时间依赖性
• 3.3.3 β1 整合素对滋养层细胞与Ｉ型鼠尾胶原粘附力的影响
• 3.3.4 滋养层细胞与血管内皮细胞间的粘附力
• 3.4 讨论
• 4 胚胎绒毛滋养层细胞 β1 整合素表达的特性
• 4.1 引言
• 4.2 实验材料
• 4.2.1 仪器
• 4.2.2 药品和试剂
• 4.3 实验方法
• 4.3.1 绒毛组织不同部位滋养层细胞β1 整合素的表达
• 4.3.2 剪切应力作用下绒毛滋养层细胞β1 整合素的表达
• 4.3.3 绒毛滋养层细胞与内皮细胞共培养时β1 整合素的表达
• 4.3.4 统计学分析
• 4.4 实验结果
• 4.4.1 胚胎绒毛组织中滋养层细胞β1 整合素表达特性
• 4.4.2 剪切应力对滋养层细胞β1 整合素表达的影响
• 4.4.3 内皮细胞的参与对滋养层细胞β1 整合素表达的影响
• 4.5 讨论
• 5 结论与展望
• 5.1 全文的主要研究结论
• 5.1.1 建立了一种简单稳定的滋养层细胞体外培养方法
• 5.1.2 滋养层细胞的粘附力学特性具有可调节性
• 5.1.3 β1 整合素在滋养层细胞的迁移过程中起着重要的调节作用
• 5.2 后续工作建议
• 致谢
• 参考文献
• 附录
• A 作者在攻读硕士学位期间发表的论文
• B 作者在攻读硕士学位期间参加科研项目
• C 英汉对照表