海南霉素产生菌的菌种选育和发酵工艺研究

论文摘要

海南霉素属聚醚类抗生素,为新型的消化促进剂,它具有高效、低毒和低残留等特点,被广泛的应用于畜牧业。本文的主要目的是通过对海南霉素产生菌稠李链霉菌东方变种（Streptomyoes padunus var. dongfanggeusis）进行菌种选育、菌种保藏和发酵工艺的研究。运用微波诱变因子进行菌种诱变后,结合合理化的选育和自然筛选,筛选得到抗自身代谢产物的突变株海南霉素高产菌株FCD-19,发酵单位为4300μg/mL,较出发菌株提高了50%。经过4次传代表明,菌株FCD-19具有良好的遗传稳定性。通过对沙土管保藏、5℃冰箱保藏以及-70℃冰箱三种保藏方法的对比,得出-70℃冰箱保藏为最优保藏条件。利用单因素实验确定了发酵培养基中基本的碳源、氮源及其含量,通过正交实验对其主要原材料碳氮源和淀粉含量进行分析,得到最佳培养基组成。优化的发酵培养基配方为:葡萄糖1.5%,可溶性淀粉8%,硫酸镁0.05%,黄豆饼粉1%,鱼粉0.05%、酵母粉0.05%、蛋白胨0.05%,pH值7.0。通过单因素实验研究了菌种种龄对种子液及接种量对发酵代谢的影响,优化的培养条件为摇瓶种子种龄44h,发酵接种量为8%。通过单因素实验和正交实验海南霉素的优化后的发酵工艺为,通气比0.8、培养温度28℃, 48h开始流加补料,发酵周期120h。利用优化后的配方及培养条件进行发酵培养,海南霉素发酵效价达到了达4900μg/ml。

论文目录

• 摘要
• ABSTRACT
• 第一章 文献综述
• 1.1 海南霉素的结构与理化性质
• 1.1.1 海南霉素的发现
• 1.1.2 海南霉素的化学结构
• 1.1.3 海南霉素的物理性质
• 1.2 海南霉素的药理活性
• 1.2.1 海南霉素的抗球虫机理
• 1.2.2 海南霉素的抗菌谱
• 1.2.3 海南霉素的毒理学
• 1.3 海南霉素的应用进展
• 1.3.1 对反刍动物瘤胃的调控
• 1.3.2 抗禽类球虫病
• 1.4 海南霉素工艺的研究现状
• 1.4.1 菌种选育及保藏
• 1.4.2 发酵工艺条件的影响
• 1.5 本文研究的主要内容及意义
• 1.5.1 本文研究的主要内容
• 1.5.2 本文研究的主要意义
• 第二章 海南霉素高产菌株的选育及保存
• 2.1 材料与方法
• 2.1.1 菌种与培养基
• 2.1.2 主要仪器与设备
• 2.1.3 生物效价的测定
• 2.1.4 发酵液氨基氮测定
• 2.1.5 糖的测定
• 2.1.6 发酵液菌浓的测定
• 2.1.7 孢子计数
• 2.1.8 菌种筛选实验方法
• 2.1.9 菌种保存
• 2.2 结果与分析
• 2.2.1 微波诱变剂量的选择
• 2.2.2 筛选高产菌株自身代谢物浓度的选择
• 2.2.3 诱变筛选结果分析
• 2.2.4 耐药突变菌株FCD-19 的遗传稳定性实验
• 2.2.5 FCD-19 菌种车间发酵
• 2.2.6 不同保藏方法的菌种生长与代谢特征
• 2.3 本章小结
• 第三章 海南霉素发酵培养基配方的研究
• 3.1 材料与方法
• 3.1.1 菌种与培养基
• 3.1.2 检测方法
• 3.1.3 试验方法
• 3.2 结果与分析
• 3.2.1 不同碳源对产物的影响
• 3.2.2 不同氮源对产物的影响
• 3.2.3 不同葡萄糖含量对发酵的影响
• 3.2.4 不同淀粉含量对发酵的影响
• 4最佳浓度的确定'>3.2.5 MgSO₄最佳浓度的确定
• 3.2.6 还原糖浓度对产物的影响
• 3.2.7 正交实验确定最佳培养基组成
• 3.3 本章小结
• 第四章 海南霉素发酵工艺优化
• 4.1 材料与方法
• 4.1.1 菌种与培养基
• 4.1.2 检测方法
• 4.1.3 试验方法
• 4.2 结果与分析
• 4.2.1 不同培养时间的孢子对液体种子生长的影响
• 4.2.2 不同种子接种量对液体种子生长影响
• 4.2.3 不同通气比对发酵的影响
• 4.2.4 不同发酵时间对发酵的影响
• 4.2.5 发酵培养基的初始pH 对发酵的影响
• 4.2.6 不同发酵温度对发酵的影响
• 4.2.7 海南霉素发酵条件的正交实验优化
• 4.2.8 流加补料对发酵的影响
• 4.2.9 消泡剂对发酵的影响
• 4.2.10 50L 发酵罐发酵验证
• 4.3 本章小结
• 第五章 总结与展望
• 5.1 总结
• 5.2 展望
• 参考文献
• 致谢