导读:本文包含了组织块培养论文开题报告文献综述及选题提纲参考文献，主要关键词:乳腺癌细胞,原代培养技术,原代细胞纯化,鉴定
组织块培养论文文献综述
王敏,陆祥,曾峰,檀军,侯泽宇[1]（2019）在《人乳腺癌原代细胞组织块培养方法的改良及其鉴定》一文中研究指出目的通过对人乳腺癌原代细胞组织块培养方法进行改良,建立一种快速高效可获得高纯度的人乳腺癌细胞原代培养方法,为乳腺癌深入研究提供实验基础。方法取经临床病理诊断确诊为乳腺导管原位癌患者的癌组织标本,所有样本随机分为改良组(全程正置培养瓶进行培养,原代细胞铺满瓶底50%左右,用延长酶消化时间差法一次性纯化原代细胞)和传统组(翻转培养瓶倒置孵箱1～2 h后,再正置培养瓶培养,原代细胞铺满瓶底80%～100%时,用反复酶消化时间差法纯化原代细胞)。在倒置显微镜下观察,比较两组原代细胞爬出时间、爬出数量和贴壁生长情况;细胞计数比较两组组织块培养7 d后获得贴壁细胞总数;免疫组化和流式细胞术鉴定、比较两组纯化后原代细胞的纯度;MTT法检测两组纯化培养48 h后贴壁细胞的活性。结果经改良组织块培养法2 d后,见大量细胞从组织块四周爬出,培养3 d后见爬出原代细胞贴壁生长,胞质展开,培养5 d后见细胞融合贴壁生长,铺满瓶底50%左右;而传统组织块培养法培养2 d后见少量细胞爬出,培养5 d才见少量细胞贴壁生长,培养10d后原代细胞方可铺满瓶底50%左右;人乳腺癌原代细胞培养7 d贴壁细胞总量,改良组为(9.88±0.20)×10~5个,传统组为(4.88±0.21)×10~5个;纯化后改良组细胞纯度为(99.13±0.06)%,传统组为(75.72±4.96)%;纯化培养48 h后贴壁原代细胞活性改良组为(0.86±0.03),传统组为(0.47±0.01),以上观察指标均明显高于传统组织块培养方法,有统计学意义(P<0.05)。获得的贴壁人乳腺癌原代细胞胞质展开,多呈扁平多边形,细胞体积较大,细胞核多位于细胞中央,相互衔接后呈典型的"铺路石"状,细胞结合紧密,生长分裂旺盛。结论本实验成功建立了一种高效快速获得高纯度的人原代乳腺癌细胞原代培养的方法,为进一步的实验研究奠定基础。(本文来源于《遵义医学院学报》期刊2019年04期）
张树华,张帆,Christopher,Burlak,陈庆[2]（2019）在《猪尾小组织块贴壁培养法分离培养成纤维细胞及转染效率的研究》一文中研究指出目的采取猪尾小组织块贴壁法成功分离培养出原代猪成纤维细胞并进行细胞不同时期的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性质粒转染效率的研究。方法猪尾小组织块贴壁培养法分离培养出原代猪成纤维细胞后,传代并进行冻存和复苏,比较猪成纤维细胞原代培养、传代培养和复苏细胞存活率。绘制细胞原代培养、传代培养和复苏后的生长情况。分别在猪尾小组织块贴壁培养获得原代成纤维细胞,细胞传代和复苏后进行细胞GFP阳性质粒的Neon电转染,比较不同转染时期细胞存活率和生长情况,转染后24h和48h分别采用荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞的GFP质粒阳性表达率。结果猪尾小组织块贴壁培养可以成功分离培养出猪成纤维细胞,细胞冻存后复苏能保持原代细胞生物学特性,原代细胞活力很高,细胞存活率97.670%,传代培养后细胞存活率95.670%,复苏细胞存活率仍在90%以上。原代培养、传代培养和复苏培养细胞生长曲线均呈"S"型,复苏细胞生长略微缓慢。原代培养、传代培养和复苏细胞电转染后细胞存活率均有少许下降,细胞生长增殖能力减弱,但是细胞生长曲线仍呈"S"型曲线。Neon电转染后24h均可获得GFP质粒阳性表达的猪成纤维细胞,荧光显微镜均检测到GFP质粒阳性表达的成纤维细胞,48h后流式细胞仪检测显示原代细胞阳性率8.01%,稍高于传代细胞的7.91%和复苏细胞的7.86%。复苏细胞存活率下降,转染后细胞活力下降,但转染后仍可得到7.86%GFP质粒阳性表达的猪成纤维细胞,原代培养细胞能够获得更高的阳性率,差异有统计学意义。结论猪尾小组织块贴壁培养法可以成功分离培养出成纤维细胞,细胞传代会对细胞活力有影响,冻存后复苏也会影响细胞的存活率和细胞增殖能力。原代细胞、传代细胞和复苏细胞转染均能获得GFP阳性质粒表达。原代培养细胞具有更佳的细胞活力和阳性转染率,进行基因敲除或基因敲入等基因编辑和体细胞克隆研究,选择原代细胞作为转染对象能获得更好的基因编辑成功率。(本文来源于《华中科技大学学报(医学版)》期刊2019年01期）
李钟鹏,庞芳河[3]（2018）在《乳鼠雪旺细胞与自体颅骨组织块体外联合培养对颅骨组织生长的影响》一文中研究指出目的探讨乳鼠雪旺细胞与自体颅骨组织块体外联合培养对颅骨组织生长的影响。方法培养和纯化雪旺细胞,将27块颅骨组织块分为A组(颅骨组织块单独培养)、B组(雪旺细胞和颅骨组织快直接接触培养组)和C组(雪旺细胞和颅骨组织块通过钛板间接接触培养组),每组9块,分别培养1 w、2 w、3 w。采用免疫组化法测定颅骨组织骨钙素(BGP)和骨桥蛋白(OPN)水平,测定培养液中骨碱性磷酸酶(BALP)活性含量。结果叁组之间BGP水平和BALP活性含量差异有统计学意义(F=18. 912,P<0. 001)。两两比较:B组各时间点BGP水平和BALP活性含量明显高于A组和C组(P<0. 05),C组各时间点BGP水平和BALP活性含量明显高于A组(P<0. 05);同组不同时间点BGP水平和BALP活性含量比较差异有统计学意义(P<0. 05),随着时间延长BGP水平和BALP活性含量升高。经方差分析,叁组之间OPN水平差异无统计学意义(F=1. 510,P>0. 05)。不同时间点和不同组间两两比较差异均无统计学意义(P>0. 05)。结论雪旺细胞可以促进颅骨组织的生长,雪旺细胞与颅骨组织直接接触对颅骨组织生长的促进作用更显着。(本文来源于《中国老年学杂志》期刊2018年20期）
张伟,王宇,任雨洁,张蓬勃,邓秀玲[4]（2018）在《酶消化组织块法培养人心房成纤维细胞》一文中研究指出目的建立人心房成纤维细胞体外培养的有效方法。方法无菌条件下将人右心耳标本剪成1 mm3大小组织块,经1.25 g/L胰蛋白酶预消化15 min后,用组织块贴壁法培养。通过倒置显微镜观察培养细胞生长及形态学特点,使用免疫荧光法进行细胞鉴定。结果培养3~4 d后可见细胞自组织块爬出,7~9 d后细胞可传代,传代后的细胞呈长纺锤形或多边形。免疫荧光染色发现其抗波形蛋白(vimentin)及抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)染色阳性,抗血管性血友病因子(v WF)染色阴性,鉴定为肌成纤维细胞。结论酶消化组织块法培养人心房成纤维细胞/肌成纤维细胞简便、高效,方法可行。(本文来源于《心脏杂志》期刊2018年04期）
赵娟,詹冬梅,杨默迟,樊芯[5]（2018）在《组织块联合胰酶消化法培养兔角膜缘干细胞的初步探索》一文中研究指出目的:建立一种简便、高效的兔角膜缘干细胞原代培养方法。方法:获取兔角膜缘组织,采用组织块联合胰蛋白酶消化法进行兔角膜缘干细胞体外培养,倒置显微镜下观察细胞生长情况,HE染色观察细胞形态和结构特点,并运用免疫组织化学技术进行细胞鉴定。结果:采用组织块联合胰蛋白酶消化法可以简便、快速地培养出兔角膜缘干细胞,显微镜下动态观察细胞生长良好,有较高的增殖能力;HE染色证实细胞形态和结构正常;AE5及P63免疫组织化学鉴定呈阳性。结论:采用组织块联合胰蛋白酶消化共同培养的方法,建立了一种简便、高效的兔角膜缘干细胞原代培养模式。(本文来源于《国际眼科杂志》期刊2018年04期）
刘影,高杰,吴补领[6]（2018）在《改良组织块酶消化法原代培养人牙髓干细胞的研究》一文中研究指出目的探索应用改良组织块酶消化法原代培养人牙髓干细胞并对细胞进行鉴定。方法选取18~26岁健康人因正畸或阻生而拔除的健康、完整、无龋坏的牙齿30颗,采用改良组织块酶消化法原代培养人牙髓干细胞并通过对细胞的形态观察、细胞表面标记物检测、多向分化能力检测和生长曲线检测等方法鉴定人牙髓干细胞。结果对人牙髓组织经改良组织块酶消化法原代培养得到的细胞形态类似于成纤维细胞和间充质细胞,生长曲线为S型,细胞表面标记物检测显示间充质干细胞标记物CD29、CD44、CD90表达阳性,造血干细胞表面标记物CD34、CD45、CD106表达阴性,同时细胞具有多向细胞分化的能力。结论应用改良组织块酶消化法可以从人牙髓组织中成功原代培养人牙髓干细胞。(本文来源于《口腔疾病防治》期刊2018年03期）
史小玲,王骞,鹿晓燕[7]（2017）在《无血清条件下组织块法培养人角膜上皮细胞的比较》一文中研究指出目的比较无血清条件下不同组织块法培养人角膜上皮细胞的出膜时间及出膜率。方法培养方式:A组:剥除角膜内皮及刮除角膜上皮后组织块角膜上皮面向上贴壁;B组:剥除角膜内皮及刮除角膜上皮后组织块角膜上皮面向下贴壁;C组:仅剥除角膜内皮后全层组织块角膜上皮面向上贴壁;D组:仅剥除角膜内皮后全层组织块角膜上皮面向下贴壁。相差显微镜观察细胞形态学变化,对比各组出膜时间及出膜率。结果 A组:细胞爬出时间(7.00±3.00)d,出膜率47.50%(19/40);B组:细胞爬出时间(7.55±2.58)d,出膜率45.83%(11/24);C组:细胞爬出时间(8.43±3.32)d,出膜率63.64%(14/22);D组:细胞爬出时间(7.49±2.20)d,出膜率72.22%(39/54)。卡方检验结果示,A组与D组、B组与D组出膜率相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05),余组间两两比较差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论无血清条件下不同组织块培养方式细胞爬出时间大致相同,约一周。相比较而言,仅剥除角膜内皮后全层组织块角膜上皮面向下贴壁培养法出膜率明显较高,且培养的细胞更纯、更稳定。(本文来源于《眼科新进展》期刊2017年12期）
穆睿,金磊[8]（2017）在《贴壁组织块反复消化法连续培养人牙髓干细胞及其附着纳米氧化锆仿生支架生长的实验研究》一文中研究指出目的:探讨一种经济、高效的贴壁组织块原代培养人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)的方法,提高原代hDPSCs培养过程中的效率和成功率。评价hDPSCs以纳米氧化锆仿生支架为载体附着和生长情况。方法:收集临床上拔除的新鲜、无龋、无牙髓炎和牙髓坏死的青年人(18-25周岁)恒牙,无菌分离牙髓组织,剪碎,用组织块贴壁反复消化法连续培养hDPSCs,有限稀释法克隆法纯化细胞,流式细胞仪(本文来源于《第十一次全国口腔修复学学术会议论文汇编》期刊2017-10-22）
李具宝[9]（2017）在《组织块法培养膝骨关节炎患者退变软骨细胞及形态特征观察》一文中研究指出目的采用组织块细胞培养法进行膝骨关节炎患者退变软骨组织的细胞培养、传代及形态特征观察。方法 6例患者标本均来源于云南中医学院第一附属医院骨科确诊为膝骨关节炎的住院患者,行人工膝关节置换手术切出的新鲜退变软骨组织,采用组织块培养法培养原代细胞,待原代细胞长满皿底,用2.5g/L的胰蛋白酶溶液进行消化,传代细胞爬片增殖1周,用4%的多聚甲醛固定15min,进行甲苯胺蓝、阿力新蓝染色及Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、X型胶原、BFGF、MMP13免疫荧光染色观察。结果原代培养第7~9天可见少量细胞散在分布于组织块周围,3周出现细胞自融,4周基本长满皿底。细胞多呈梭形或多角形,细胞核偏于细胞的一侧而贴近细胞膜。Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原免疫荧光均有一定的表达,BFGF、MMP13、X型胶原免疫荧光表达均较高。结论通过组织块细胞培养法能获得一定数量的退变软骨细胞,可成功地进行传代及形态特征观察;同时提示膝骨关节炎患者退变软骨细胞主要为成纤维样软骨细胞和肥大软骨样细胞,并伴有大量降解酶的释放。(本文来源于《第二十四届中国中西医结合骨伤科学术年会论文汇编》期刊2017-09-21）
罗涛,杨亚冬,唐靓,张文元[10]（2017）在《胶原酶消化结合组织块培养法分离纯化兔肺成纤维细胞》一文中研究指出目的探讨胶原酶消化组织块结合法分离纯化新生兔肺成纤维细胞。方法取新生兔肺,剪成组织块,用Ⅳ型胶原酶轻度消化后,进行组织块贴壁培养,分离纯化肺成纤维细胞,然后进行原代、传代培养,用MTT法测定细胞生长曲线。结果组织块贴壁培养2 d,镜下可见组织块周边有少量长梭形细胞逸出,4 d时组织块周围有大量细胞爬出,生长迅速,7 d时接近融合,9 d时高度融合。传代2次后杂细胞基本去除,细胞活性状态较好的为1~4代。5~6代后细胞的增殖能力逐渐下降,细胞出现逐渐老化现象。结论Ⅳ型胶原酶轻度消化后结合组织块贴壁法是一种较为可靠快速的肺成纤维细胞分离纯化培养方法,使用该法可获得具有典型形态特征及活性较好的肺成纤维细胞。(本文来源于《现代医药卫生》期刊2017年17期）
组织块培养论文开题报告
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
目的采取猪尾小组织块贴壁法成功分离培养出原代猪成纤维细胞并进行细胞不同时期的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)阳性质粒转染效率的研究。方法猪尾小组织块贴壁培养法分离培养出原代猪成纤维细胞后,传代并进行冻存和复苏,比较猪成纤维细胞原代培养、传代培养和复苏细胞存活率。绘制细胞原代培养、传代培养和复苏后的生长情况。分别在猪尾小组织块贴壁培养获得原代成纤维细胞,细胞传代和复苏后进行细胞GFP阳性质粒的Neon电转染,比较不同转染时期细胞存活率和生长情况,转染后24h和48h分别采用荧光显微镜和流式细胞仪检测细胞的GFP质粒阳性表达率。结果猪尾小组织块贴壁培养可以成功分离培养出猪成纤维细胞,细胞冻存后复苏能保持原代细胞生物学特性,原代细胞活力很高,细胞存活率97.670%,传代培养后细胞存活率95.670%,复苏细胞存活率仍在90%以上。原代培养、传代培养和复苏培养细胞生长曲线均呈"S"型,复苏细胞生长略微缓慢。原代培养、传代培养和复苏细胞电转染后细胞存活率均有少许下降,细胞生长增殖能力减弱,但是细胞生长曲线仍呈"S"型曲线。Neon电转染后24h均可获得GFP质粒阳性表达的猪成纤维细胞,荧光显微镜均检测到GFP质粒阳性表达的成纤维细胞,48h后流式细胞仪检测显示原代细胞阳性率8.01%,稍高于传代细胞的7.91%和复苏细胞的7.86%。复苏细胞存活率下降,转染后细胞活力下降,但转染后仍可得到7.86%GFP质粒阳性表达的猪成纤维细胞,原代培养细胞能够获得更高的阳性率,差异有统计学意义。结论猪尾小组织块贴壁培养法可以成功分离培养出成纤维细胞,细胞传代会对细胞活力有影响,冻存后复苏也会影响细胞的存活率和细胞增殖能力。原代细胞、传代细胞和复苏细胞转染均能获得GFP阳性质粒表达。原代培养细胞具有更佳的细胞活力和阳性转染率,进行基因敲除或基因敲入等基因编辑和体细胞克隆研究,选择原代细胞作为转染对象能获得更好的基因编辑成功率。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
组织块培养论文参考文献
[1].王敏,陆祥,曾峰,檀军,侯泽宇.人乳腺癌原代细胞组织块培养方法的改良及其鉴定[J].遵义医学院学报.2019
[2].张树华,张帆,Christopher,Burlak,陈庆.猪尾小组织块贴壁培养法分离培养成纤维细胞及转染效率的研究[J].华中科技大学学报(医学版).2019
[3].李钟鹏,庞芳河.乳鼠雪旺细胞与自体颅骨组织块体外联合培养对颅骨组织生长的影响[J].中国老年学杂志.2018
[4].张伟,王宇,任雨洁,张蓬勃,邓秀玲.酶消化组织块法培养人心房成纤维细胞[J].心脏杂志.2018
[5].赵娟,詹冬梅,杨默迟,樊芯.组织块联合胰酶消化法培养兔角膜缘干细胞的初步探索[J].国际眼科杂志.2018
[6].刘影,高杰,吴补领.改良组织块酶消化法原代培养人牙髓干细胞的研究[J].口腔疾病防治.2018
[7].史小玲,王骞,鹿晓燕.无血清条件下组织块法培养人角膜上皮细胞的比较[J].眼科新进展.2017
[8].穆睿,金磊.贴壁组织块反复消化法连续培养人牙髓干细胞及其附着纳米氧化锆仿生支架生长的实验研究[C].第十一次全国口腔修复学学术会议论文汇编.2017
[9].李具宝.组织块法培养膝骨关节炎患者退变软骨细胞及形态特征观察[C].第二十四届中国中西医结合骨伤科学术年会论文汇编.2017
[10].罗涛,杨亚冬,唐靓,张文元.胶原酶消化结合组织块培养法分离纯化兔肺成纤维细胞[J].现代医药卫生.2017