新型Ca～（2+）荧光探针STDBT胞质、胞核Ca～（2+）同时测定研究

论文摘要

Ca2+作为细胞内的第二信使,具有重要的生物学功能。而Ca2+的信使功能是通过细胞内游离Ca2+浓度及其分布的时空依赖性变化来实现的,Ca2+信号的产生和终止是细胞内Ca2+增减、波动的结果。因此亚细胞水平Ca2+含量及其分布变化的动态监测对于Ca2+信号传递本质的认识至关重要。其中,细胞核Ca2+在细胞有丝分裂、细胞凋亡、基因转录、DNA转录与修复等活动中发挥着重要的调节作用,因此细胞核Ca2+的研究对阐明疾病的发病机理及防治具有重要的意义。目前,细胞内游离Ca2+的研究主要是用荧光探针标记,然后通过荧光显微成像分析来实现的,在此探针的性能至关重要,探针若不能区分标记特定亚细胞区域,荧光显微镜也就根本无法得到有关区域的Ca2+信息。但迄今为止,还没有可区分性的同时标记胞核和胞质区域的Ca2+探针,而常采用将一种探针改性后导入胞核和胞质,这需要对改性后的探针进行校准,而校准又受到细胞环境的影响,故常无法得到准确的结果,导致得出相互矛盾的结论,尤其是胞核Ca2+和胞质Ca2+的调节机制研究,尚存在争议。为此,本论文采用我们实验室自行合成的核、质双标的新型Ca2+荧光探针STDBT同时标记胞核和胞质,进行了不同激动剂刺激后胞核Ca2+和胞质Ca2+的同时测定,探讨了其调节机制,为细胞胞质、胞核Ca2+信号转导机制研究提供了有意义的参考。 本论文的研究主要开展了以下几个方面:1.采用激光共聚焦显微术,应用核、质双标的新型Ca2+荧光探针STDBT标记大鼠心肌细胞,探讨了5-HT诱导大鼠心肌细胞核[Ca2+]n和胞质[Ca2+]c动员的机理。2.应用双靶向性新型Ca2+荧光探针STDBT负载大鼠心肌细胞,结合激光共聚焦显微镜,研究了大鼠心肌细胞胞核[Ca2+]n和胞质[Ca2+]n的调节机制。3.应用新型Ca2+荧光探针STDBT负载大鼠心肌细胞,结合激光共聚焦显微镜,在亚细胞水平探讨IGF-1诱导胞质[Ca2+]c和胞核[Ca2+]n升高的机制。 本研究论文主要包括以下两个部分: 一.概述 论文对目前报道过的亚细胞区域（如:内质网、线粒体、胞核等）Ca2+的测定方法进展和测定研究进展进行了较为详尽的综述。 二.新型Ca2+荧光探针STDBT胞质、胞核钙同时测定研究

论文目录

• 第一章 概述
• 1.1 引言
• 2+的分布及其信使作用'>1.2 胞内Ca²⁺的分布及其信使作用
• 2+荧光探针法'>1.3 Ca²⁺荧光探针法
• 1.3.1 发光蛋白法
• 2+荧光探针法'>1.3.2 小分子Ca²⁺荧光探针法
• 2+的测定研究进展'>1.4 亚胞内游离Ca²⁺的测定研究进展
• 2+的测定研究'>1.4.1 膜Ca²⁺的测定研究
• 2+的测定研究'>1.4.2 内质网Ca²⁺的测定研究
• 2+的测定研究'>1.4.3 线粒体Ca²⁺的测定研究
• 2+的测定研究'>1.4.4 胞核Ca²⁺的测定研究
• 1.5 本论文的主要研究内容
• 第二章 STDBT用于5-HT诱导心肌细胞钙动员的机制研究
• 2.1 引言
• 2.2 材料与方法
• 2.2.1 试剂
• 2.2.2 心肌细胞的分离
• 2+荧光探针标记'>2.2.3 细胞Ca²⁺荧光探针标记
• 2.2.4 实验分组及检测方法
• 2.2.5 数据分析
• 2.3 结果
• 2.3.1 细胞荧光图像观察
• 2+变化机理研究'>2.3.2 5-HT诱导的大鼠心肌细胞胞核、胞质Ca²⁺变化机理研究
• 2.4 讨论
• 2.5 结论
• 2+和胞质Ca²⁺的调节机理研究'>第三章 STDBT用于大鼠心肌细胞胞核Ca²⁺和胞质Ca²⁺的调节机理研究
• 3.1 引言
• 3.2 材料与方法
• 3.2.1 试剂
• 3.2.2 心肌细胞的分离
• 2+荧光探针标记'>3.2.3 细胞Ca²⁺荧光探针标记
• 3.2.4 实验分组及检测方法
• 3.2.5 数据分析
• 3.3 结果
• 3.3.1 细胞荧光图像观察
• 2+和胞质Ca²⁺的调节机理研究'>3.3.2 心肌细胞胞核Ca²⁺和胞质Ca²⁺的调节机理研究
• 3.4 讨论
• 3.5 结论
• 第四章 IGF-1对心肌细胞核钙、质钙调节机制研究
• 4.1 引言
• 4.2 材料与方法
• 4.2.1 试剂
• 4.2.2 心肌细胞的分离
• 2+荧光探针标记'>4.2.3 细胞Ca²⁺荧光探针标记
• 4.2.4 实验分组及检测方法
• 4.2.5 数据分析
• 4.3 结果
• 4.4 讨论
• 4.5 结论
• 总结
• 参考文献
• 致谢
• 攻读学位期间的研究成果