水稻WRKY19和WRKY89基因启动子的分析

论文题目: 水稻WRKY19和WRKY89基因启动子的分析

论文类型: 博士论文

论文专业: 植物病理学

作者: 郝中娜

导师: 郭泽建

关键词: 基因,启动子,基因,组织特异性,诱导表达,水稻

文献来源: 浙江大学

发表年度: 2005

论文摘要: WRKY基因家族是一类在植物中起特异作用的转录调控因子,它被证明参与植物的抗病反应,还影响植物的衰老、抗胁迫以及生长、发育。启动子是基因表达调控的重要元件,启动子的活性间接反映了它所控制的基因的表达。为了掌握OsWRKY19和OsWRKY89这两个基因在各种反应中的调控作用,我们采用GUS报告基因对OsWRKY19和OsWRKY89动子的功能进行了分析。实验研究的主要内容包括以下两个部分: 1 OsWRKY19基因启动子的分析 根据网上预测的OsWRKY19基因设计引物从水稻（粳稻品种秀水11）中扩增了该基因的启动子部分,命名为OsW19p,将OsW19p的序列放在启动子顺式作用元件预测网站PLACE上进行分析,预测到了20多个可能存在的元件。构建了OsW19p和7个5′端缺失载体,将缺失载体分别命名为p105、p378、p678、p977、p1106、p1205和p1306。用农杆菌介导法将所有植物表达载体转化水稻,均获得了一定数量的转基因系。 实验中发现2,4-D强烈抑制OsW19p::GUS在愈伤阶段的表达,而其他缺失驱动的GUS的表达不被2,4-D抑制,推测在-1404～-1306bp间存在2,4-D反应元件,但在这个区间内没能预测到相关的元件,认为这个反应元件是一个新元件。用GUS荧光测定法测定T0代OsW19p和7个5′端缺失体转基因植株苗叶片中的GUS活性,结果证明在OsW19p片段中的-1404～-1306bp和-1205～-977bp区间内包含一些正调控作用元件,在-1306～-1205bp和-977～-378bp区间内包含一些负调控作用元件。 研究OsW19p::GUS在转基因植株中的组织特异性表达时发现:在转基因植株各个时期的叶片、茎和叶鞘中均可检测到GUS的表达;在花中是花粉无表达;成熟种子无表达;种子萌发即胚突破种皮时胚中有表达,胚芽鞘和种子根中均有表达,根尖中无表达;二叶一心期时种子根、不定根及它们的侧根中均有表达,但根尖均无表达;五叶期根部只有侧根中有表达,但根尖中均无表达。

论文目录:

目录

摘要

Abstract

第一章 文献综述

1.1 WRKY转录因子的介绍

1.1.1 WRKY转录因子的简介

1.1.2 WRKY转录因子的功能

1.2 植物启动子的研究进展

1.2.1 启动子的结构特征

1.2.2 组成型启动子

1.2.3 组织特异性启动子

1.2.4 诱导型启动子

1.2.5 启动子顺式作用元件的电子分析

1.2.6 启动子活性检测中使用的报告基因

1.2.7 问题与展望

1.3 本研究选题依据及研究内容

1.3.1 选题依据及意义

1.3.2 研究内容

第二章 OsWRKY19基因启动子的分析

2.1 材料和方法

2.1.1 实验材料

2.1.2 水稻基因组DNA的提取

2.1.3 OsWRKY19基因启动子片段的克隆

2.1.4 植物表达载体的构建

2.1.5 农杆菌介导法转化水稻

2.1.6 GUS活性的检测方法

2.1.7 OsW19p∷GUS诱导表达的研究

2.2 结果和分析

2.2.1 OsWKY19基因启动子片段的克隆

2.2.2 OsW19p序列的分析

2.2.3 OsW19p缺失载体的PCR鉴定

2.2.4 2，4-D抑制OsW19p∷GUS在愈伤阶段的表达

2.2.5 转基因植株的获得

2.2.6 不同长度OsW19p驱动GUS基因的表达水平

2.2.7 OsW19p∷GUS在转基因植株中的组织特异性表达

2.2.8 OsW19p∷GUS诱导表达的研究

2.3 讨论

2.3.1 OsW19p片段的序列分析

2.3.2 农杆菌介导法转化水稻

2.3.3 OsW19p∷GUS在转基因植株中的组织特异性表达

2.3.4 OsW19p∷GUS诱导表达的研究

2.4 小结

第三章 OsWRKY89基因启动子的分析

3.1 材料和方法

3.1.1 OsWRKY89基因启动子片段的克隆

3.1.2 转基因植株的PCR鉴定

3.2 结果和分析

3.2.1 OsWRKY89基因启动子片段的克隆和序列分析

3.2.2 2，4-D抑制OsW89p∷GUS在愈伤阶段的表达

3.2.3 转基因植株的获得

3.2.4 OsW89p转基因植株不同组织中GUS的活性

3.2.5 OsW89p∷GUS在转基因植株中的组织特异性表达

3.2.6 OsW89p∷GUS诱导表达的研究

3.3 讨论

3.3.1 OsW89p片段的序列分析

3.3.2 OsW89p∷GUS在转基因植株中的组织特异性表达

3.3.3 OsW89p∷GUS诱导表达的研究

3.4 小结

创新点

下一步研究计划

参考文献

附录

致谢

发布时间: 2005-07-22

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标签：基因论文;  启动子论文;  组织特异性论文;  诱导表达论文;  水稻论文;